乙偶姻是一種特殊的香料物質(zhì),呈奶油香氣,作為一種重要的平臺化合物,在醫(yī)藥、食品等許多領域都受到廣泛關注與利用。近年來,利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙偶姻越來越受到人們的推崇�？莶菅挎邨U菌為益生菌,發(fā)酵可產(chǎn)生乙偶姻、2,3-丁二醇等物質(zhì),且生產(chǎn)過程安全無污染。本研究以符合安全要求的枯草芽孢桿菌為代謝研究菌種,對其發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的工藝,包括培養(yǎng)基配方、發(fā)酵條件及分離提取條件等進行了優(yōu)化,最后得到產(chǎn)量較高的乙偶姻純品,添加于自制斑馬魚飼料,觀察其對斑馬魚的誘食效果,并與市場上常見誘食劑的誘食效果進行了對比試驗。主要研究結果如下:1、通過高效液相色譜檢測法,制作主要發(fā)酵產(chǎn)物乙偶姻和發(fā)酵副產(chǎn)物2,3-丁二醇的標準曲線,所得標準曲線的相關系數(shù)R²分別為0.9997和0.9998,說明模型擬合效果好,曲線線性關系強,可行度高。2、篩選設計產(chǎn)乙偶姻的培養(yǎng)基配方,繼而對Bacillus.subtilis 168發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻所用培養(yǎng)基進行了單因素水平優(yōu)化試驗,得到培養(yǎng)基成分為:葡萄糖80 g、酵母浸粉10 g、K₂HPO₄10 g、尿素5 g、MgSO... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 水產(chǎn)動物誘食劑的研究進展
        1.1.1 水產(chǎn)動物誘食劑的概念及其應用價值
        1.1.2 水產(chǎn)動物誘食劑的主要功能
        1.1.3 水產(chǎn)誘食劑的作用機理
    1.2 產(chǎn)乙偶姻菌株選育的研究進展
        1.2.1 產(chǎn)乙偶姻的常用菌株
        1.2.2 枯草芽孢桿菌的特性
        1.2.3 枯草芽孢桿菌主要用途
        1.2.4 枯草芽孢桿菌代謝產(chǎn)乙偶姻的機理
    1.3 乙偶姻的性質(zhì)和作用
    1.4 乙偶姻的生產(chǎn)方法
        1.4.1 化學合成法
        1.4.2 乙偶姻的生物合成法
    1.5 提高乙偶姻合成效率的方法
        1.5.1 發(fā)酵培養(yǎng)基成分的優(yōu)化
        1.5.2 發(fā)酵條件的優(yōu)化
    1.6 乙偶姻檢測方法研究進展
    1.7 本課題研究內(nèi)容及研究意義
        1.7.1 研究內(nèi)容
        1.7.2 研究意義
2 材料與方法
    2.1 試驗試劑與儀器
        2.1.1 試驗試劑
        2.1.2 試驗儀器
    2.2 乙偶姻檢測方法
        2.2.1 液相條件的確定
        2.2.2 乙偶姻和2,3-丁二醇標準曲線繪制
    2.3 高產(chǎn)乙偶姻菌株發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選及優(yōu)化
        2.3.1 菌種及活化
        2.3.2 培養(yǎng)基配方的篩選
        2.3.3 種齡的確定
        2.3.4 最佳發(fā)酵周期確定
    2.4 發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化試驗
        2.4.1 葡萄糖濃度優(yōu)化
        2.4.2 玉米漿干粉濃度優(yōu)化
        2.4.3 最佳氮源的篩選
        2.4.4 酵母浸粉濃度濃度優(yōu)化
        2.4.5 K2HPO4 濃度優(yōu)化
    2.5 培養(yǎng)條件優(yōu)化試驗
        2.5.1 發(fā)酵培養(yǎng)溫度的確定
        2.5.2 初始p H的確定
        2.5.3 接種量的確定
        2.5.4 裝液量的確定
    2.6 響應面試驗優(yōu)化最佳培養(yǎng)基
        2.6.1 響應面回歸模型的建立
        2.6.2 響應面優(yōu)化驗證試驗
    2.7 培養(yǎng)基發(fā)酵條件優(yōu)化試驗
        2.7.1 發(fā)酵液中乙偶姻理化性質(zhì)研究
        2.7.2 發(fā)酵液中乙偶姻酸堿穩(wěn)定性試驗
        2.7.3 發(fā)酵液中乙偶姻熱穩(wěn)定性試驗
        2.7.4 發(fā)酵液中乙偶姻在不同飽和度硫酸銨中的穩(wěn)定性試驗
        2.7.5 有機溶劑對發(fā)酵液中乙偶姻穩(wěn)定性的影響試驗
    2.8 低碳脅迫下對枯草芽孢桿菌代謝產(chǎn)乙偶姻及相關基因轉錄組分析
        2.8.1 低碳脅迫培養(yǎng)基配制
        2.8.2 轉錄組測序
    2.9 發(fā)酵液中乙偶姻的分離提取試驗
        2.9.1 減壓硅膠柱層析法初步分離純化發(fā)酵液中的乙偶姻
        2.9.2 高效液相法純化硅膠柱初步分離粗提品中乙偶姻
    2.10 乙偶姻對斑馬魚誘食效果研究
        2.10.1 斑馬魚基礎日糧制作
        2.10.2 試驗中斑馬魚的飼喂管理
        2.10.3 飼料中乙偶姻不同添加量對斑馬魚的誘食影響
        2.10.4 不同類型誘食劑對斑馬魚的誘食影響
    2.11 數(shù)據(jù)處理
3 結果與分析
    3.1 乙偶姻檢測結果
        3.1.1 色譜柱的確定
        3.1.2 乙偶姻和2,3-丁二醇標準曲線繪制
    3.2 高產(chǎn)乙偶姻菌株發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選及優(yōu)化結果
        3.2.1 培養(yǎng)基篩選結果
        3.2.2 最佳接種期及取樣期的確定
        3.2.3 葡萄糖濃度優(yōu)化結果
        3.2.4 玉米漿粉濃度優(yōu)化結果
        3.2.5 最佳氮源篩選結果
        3.2.6 尿素濃度優(yōu)化結果
        3.2.7 酵母浸粉濃度優(yōu)化結果
        3.2.8 K_2HPO_4 濃度優(yōu)化結果
    3.3 枯草芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻培養(yǎng)基發(fā)酵條件優(yōu)化結果
        3.3.1 溫度確定結果
        3.3.2 初始p H確定結果
        3.3.3 接種量確定結果
        3.3.4 裝液量確定結果
    3.4 響應面優(yōu)化結果
        3.4.1 回歸模型方差分析結果
        3.4.2 響應面驗證試驗結果
    3.5 枯草芽孢桿菌代謝物乙偶姻的理化性質(zhì)穩(wěn)定性測定結果
        3.5.1 酸堿穩(wěn)定性測定結果
        3.5.2 熱穩(wěn)定性測定結果
        3.5.3 硫酸銨穩(wěn)定性測定結果
        3.5.4 有機溶劑穩(wěn)定性測定結果
    3.6 低碳脅迫下對枯草芽孢桿菌代謝產(chǎn)乙偶姻及相關基因轉錄組分析結果
        3.6.1 低碳脅迫下Bacillus subtilis168 枯草芽孢桿菌代謝產(chǎn)乙偶姻
        3.6.2 枯草芽孢桿菌低碳脅迫下下調(diào)基因分析
        3.6.3 枯草芽孢桿菌低碳脅迫下上調(diào)基因分析
    3.7 枯草芽孢桿菌發(fā)酵液中乙偶姻的提取試驗結果
        3.7.1 硅膠柱層析初步純化發(fā)酵液中乙偶姻
        3.7.2 高效液相色譜法純化粗提液中的乙偶姻
    3.8 發(fā)酵液中乙偶姻誘食效果評定結果
        3.8.1 不同乙偶姻添加量對斑馬魚誘食效果比較
        3.8.2 不同類型誘食劑對斑馬魚誘食效果比較
4 討論
    4.1 乙偶姻檢測
    4.2 枯草芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻培養(yǎng)基主要影響因素優(yōu)化結果
        4.2.1 葡萄糖濃度對Bacillus Subtilis168 發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響
        4.2.2 尿素對Bacillus Subtilis168 發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響
        4.2.3 玉米漿干粉對Bacillus Subtilis168 發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響
    4.3 發(fā)酵液中乙偶姻理化性質(zhì)穩(wěn)定性
    4.4 低碳脅迫下枯草芽孢桿菌測序分析
    4.5 乙偶姻作為誘食劑誘食效果討論
5 結論
6 展望
參考文獻
致謝
發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[5]枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)乙偶姻的研究[D]. 郝飛.江南大學 2013
[6]乙偶姻高產(chǎn)菌株選育及其發(fā)酵研究[D]. 張燕婕.江南大學 2013



本文編號：3202270