本文采用RT-PCR和RACE技術(shù)首次克隆了青島文昌魚銅鋅超氧化物歧化酶基因的全長cDNA序列1285bp,該基因開放閱讀框全長468bp,編碼155個氨基酸,有7個可與銅鋅離子結(jié)合的位點,預(yù)測分子量大約為15718.32Da,理論等電點為5.60,編碼的蛋白質(zhì)不存在亞細(xì)胞定位的信號肽和跨膜結(jié)構(gòu)域,屬于icCu/Zn-SOD。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明文昌魚的icCu/Zn-SOD位于脊椎動物大分支和無脊椎動物大分支的中間,并且更偏向于脊椎動物。原位雜交實驗表明,銅鋅超氧化物歧化酶基因在文昌魚的背神經(jīng)周圍、肝盲囊、性腺以及脊索中均有表達(dá)。在肝盲囊、背神經(jīng)周圍等部位表達(dá)較高,推測原因是因為這些組織是構(gòu)成文昌魚抗氧化免疫系統(tǒng)的重要部位,而銅鋅超氧化物歧化酶又是生物體內(nèi)參與抗氧化免疫反應(yīng)最重要的酶類之一,因此該基因在這些部位的大量表達(dá)有助于文昌魚抗氧化免疫反應(yīng)的正常進(jìn)行。采用相對實時定量PCR中的Ct法來檢測不同Cu²⁺濃度的海水來飼養(yǎng)青島文昌魚其Cu/Zn-SOD基因的相對表達(dá),結(jié)果顯示在以0.01mg/L的濃度為基準(zhǔn),0.03mg/L時表達(dá)相對較高,隨后表達(dá)量下降,0.07m... 

【文章來源】：魯東大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1.1 文昌魚簡介
    1.2 文昌魚的發(fā)現(xiàn)，分布，種類以及生活習(xí)性
    1.3 研究背景以及研究結(jié)果
    1.4 超氧化物歧化酶的分類與分布
    1.5 SOD的作用機(jī)理
    1.6 SOD的功能
    1.7 SOD的起源與進(jìn)化
    1.8 SOD的應(yīng)用
    1.9 展望
第2章 青島文昌魚銅鋅超氧化物歧化酶基因特征與遺傳進(jìn)化分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
            2.1.1.1 主要試劑
            2.1.1.2 主要試劑盒
        2.1.2 實驗方法
            2.1.2.1 總RNA的提取
            2.1.2.2 RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA
            2.1.2.3 目的片段及全序列的獲取
    2.2 分析與討論
        2.2.1 Cu/Zn-SOD基因序列分析
        2.2.2 Cu/Zn-SOD蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)預(yù)測
        2.2.3 Cu/Zn-SOD氨基酸序列相似性分析
        2.2.4 Cu/Zn-SOD基因序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析
第3章 青島文昌魚銅鋅超氧化物歧化酶基因的表達(dá)
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗步驟
            3.1.1.1 試劑的配置
            3.1.1.2 探針的合成
            3.1.1.3 文昌魚石蠟切片的制作
            3.1.1.4 文昌魚組織切片原位雜交
        3.1.2 實驗結(jié)果
    3.2 分析與討論：
第4章 不同Cu~(2+)濃度對青島文昌魚Cu/Zn-SOD基因表達(dá)的影響
    4.1 實驗材料與方法
        4.1.1 實驗材料
            4.1.1.1 主要試劑
            4.1.1.2 主要試劑盒
        4.1.2 實驗方法
            4.1.2.1 總RNA的提取及cDNA的合成
            4.1.2.2 工作液的配制
            4.1.2.3 引物設(shè)計
    4.2 實驗結(jié)果
    4.3 分析與討論
第5章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
作者簡歷



本文編號：3182953