本文關鍵詞：高植物蛋白飼料導致的花鱸攝食抑制分子調控機制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：花鱸(Lateolabrax japonicus)是我國重要的海水養(yǎng)殖肉食性魚類品種,對配合飼料中魚粉依賴性較高,在花鱸飼料中用植物蛋白替代魚粉會導致花鱸出現明顯的攝食抑制現象。本文主要對由高植物蛋白飼料引起的花鱸攝食抑制的分子機制及其攝食調控機理進行初步研究,包括三部分內容,摘要分別如下：1.花鱸Ghrelin/Leptin-NPY/AGRP和：mTOR-NPY攝食調控信號通路相關因子全長cDNA的克隆和序列分析本試驗采用簡并引物反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和cDNA末端快速擴增(3'RACE和5'RACE)技術克隆花鱸(Lateolabrax japonicus)攝食調控因子雷帕霉素靶蛋白(mechanistic target of rapamycin, mTOR)、核糖體蛋白S6激酶beta-1 (ribosomal protein S6 kinase beta-1, S6K1)、神經肽Y前體(neuropeptide Y precursor)^腦腸肽前體(preproghrelin)和刺鼠相關蛋白(agouti-related protein, AgRP)基因cDNA全長序列。結果顯示：花鱸mTOR基因(GenBank登錄號KJ746670)cDNA全長8296 bp,開放閱讀7551 bp,編碼2516個氨基酸,預測其分子質量為286.14 Ku,與其他物種的相似性為62.0%-98.0%；S6K1基因(GenBank登錄號KJ746671)cDNA全長2232 bp,開放閱讀框1539 bp,編碼512個氨基酸,預測其分子質量為56.87 Ku,與其他物種的相似性為80.4%-84.9%；NPY precursor基因(GenBank登錄號KJ850326)cDNA全長676 bp,開放閱讀框300 bp,編碼99個氨基酸,預測其分子質量為11.26 Ku,與其他物種的相似性為53.6%-99.0%；preproghrelin基因(GenBank登錄號KJ850327)cDNA全長1201 bp,開放閱讀框324 bp,編碼107個氨基酸,預測其分子質量為12.03 Ku,與其他物種的相似性為19.6%～85.0%;AgRP1基因(GenBank登錄號KJ825853)cDNA全長739 bp,開放閱讀框429 bp,編碼142個氨基酸,預測其分子質量為15.86 Ku,與其他物種的相似性為28.9%-88.0%；AgRP2基因(GenBank登錄號KJ825854)cDNA全長1357 bp,開放閱讀框351 bp,編碼116個氨基酸,預測其分子質量為13.46 Ku,與其他物種的相似性為22.4%～93.1%,花鱸攝食調控因子cDNA全長序列的獲得將為進一步研究其攝食調控機理奠定基礎。2.高植物蛋白導致的花鱸攝食抑制時期Ghrelin/Leptin-NPY/AGRP和mTOR-NPY攝食調控信號通路的響應試驗設置等氮等能的對照組(全魚粉組)和高植物蛋白組(混合植物蛋白完全替代魚粉)飼料投喂花鱸。在高植物蛋白組出現明顯攝食抑制現象時,分別對對照組和高植物蛋白組花鱸攝食后3、6、9、12及24h的下丘腦、肝臟和胃組織Ghrelin/Leptin-NPY/AGRP和mTOR-NPY攝食調控信號通路相關基因進行RT-qPCR分析,試驗結果表明：花鱸攝食后各時間點,胃組織中,攝食后3、6、9及12h魚粉組mTOR的基因表達均顯著高于植物蛋白組(P0.05)；胃中魚粉組攝食后6和24h、肝臟中魚粉組攝食餐后9和12h S6K1的基因表達均顯著低于植物蛋白組(P0.05),而胃中魚粉組攝食后12h S6K1的基因表達則顯著高于植物蛋白組(P0.05)；肝臟中魚粉組攝食后6和9h leptin基因表達量顯著高于植物蛋白組(P0.05);下丘腦中植物蛋白組和魚粉組NPY precursor的基因表達在餐后各時間點均無顯著性差異(P0.05)：胃中魚粉組攝食后6hpreproghrelin基因表達顯著低于植物蛋白組(P0.05)；下丘腦中植物蛋白組和魚粉組AgRP1的基因表達在餐后各時間點均無顯著性差異(P0.05),攝食后6h魚粉組AgRP2的表達顯著高于植物蛋白組(P0.05);mTOR和leptin的表達降低和preproghrelin表達的增加說明了高植物蛋白組花鱸因拒絕攝食而導致機體能量水平降低,而高植物蛋白導致的攝食抑制時期花鱸中樞攝食調控系統(tǒng)對饑餓狀態(tài)缺乏有效的響應可能是導致其拒食植物蛋白飼料的原因。以上結果為進一步研究肉食性魚類對高植物蛋白飼料攝食抑制分子機制提供了理論依據。3.高植物蛋白導致花鱸攝食抑制時期下丘腦和胃差異表達轉錄組分析本試驗研究了高植物蛋白飼料對肉食性魚類花鱸攝食抑制的分子機制,在實驗第三周出現明顯攝食抑制現象時提取投喂后花鱸的RNA樣品,通過RNA-Seq技術,檢測對照組(魚粉為唯一蛋白源)和實驗組(全植物蛋白組)攝食后下丘腦和胃組織的基因表達水平變化。轉錄組結果表明：胃組織中共有5個與攝食調控相關的差異表達基因,下丘腦中共有10個與攝食調控相關的差異基因；其中促胃泌素釋放肽、胰高血糖素樣肽2受體、雌激素G蛋白偶聯受體1、促甲狀腺素beta、生長激素基因、催乳激素、生長乳素、阿黑皮素原等基因的下調和胰高血糖素-1、胰高血糖素-2及生長激素受體等基因的上調從代謝水平和生長方面表明高植物蛋白組花鱸因拒絕攝食處于饑餓狀態(tài),而YY-A肽、黑色素濃集激素樣肽及促腎上腺皮質激素受體1的上調表達可能是導致花鱸拒絕攝食高植物蛋白飼料的原因。本研究首次在轉錄組水平下揭示了花鱸不同蛋白源相關基因的表達模式,豐富了魚類對植物蛋白攝食抑制機制的研究內容。
【關鍵詞】：花鱸 高植物蛋白 魚粉替代 轉錄組 克隆 攝食調控
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S917.4
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-14
• 第一章 緒論14-22
• 1.1 肉食性魚類植物蛋白替代魚粉研究狀況14-15
• 1.2 花鱸植物蛋白替代研究進展15-16
• 1.3 Ghrelin/Leptin-NPY/AGRP和mTOR-NPY信號通路16-21
• 1.3.1 神經肽Y NPY16-17
• 1.3.2 生長激素促分泌素ghrelin17-18
• 1.3.3 刺鼠相關蛋白AgRP18
• 1.3.4 瘦素leptin18-20
• 1.3.5 雷帕霉素靶蛋白mTOR和核糖體蛋白S6激酶1 S6K120-21
• 1.4 技術路線21-22
• 第二章 花鱸Ghrelin/Leptin-NPY/AGRP和mTOR-NPY攝食調控信號通路相關因子全長cDNA的克隆和序列分析22-49
• 2.1 前言22-23
• 2.2 材料與方法23-27
• 2.2.1 試驗材料23
• 2.2.2 試驗方法23-27
• 2.3 結果27-30
• 2.3.1 mTOR、S6K1、NPY precursor、preproghrelin及AgRP全長序列27-28
• 2.3.2 mTOR、S6K1、NPY precursor、preproghrelin及AgRP多序列同源性比對分析28-29
• 2.3.3 mTOR、S6K1、NPY precursor、preproghrelin及AgRP系統(tǒng)進化樹分析29-30
• 2.4 討論30-33
• 2.5 結論33-49
• 第三章 高植物蛋白導致花鱸攝食抑制時期Ghrelin/Leptin-NPY/AGRP和mTOR-NPY攝食調控信號通路的響應49-63
• 3.1 前言49-50
• 3.2 材料與方法50-53
• 3.2.1 試驗飼料50
• 3.2.2 試驗用魚50
• 3.2.3 樣品采集50
• 3.2.4 RNA的提取50
• 3.2.5 反轉錄50-51
• 3.2.6 熒光定量PCR引物設計51
• 3.2.7 熒光定量PCR51-52
• 3.2.8 數據統(tǒng)計與分析52-53
• 3.3 結果53-59
• 3.4 討論59-62
• 3.5 結論62-63
• 第四章 高植物蛋白導致花鱸攝食抑制時期下丘腦和胃差異表達轉錄組分析63-71
• 4.1 前言63
• 4.2 材料與方法63-64
• 4.2.1 試驗飼料63
• 4.2.2 試驗用魚63-64
• 4.2.3 樣品采集64
• 4.2.4 轉錄組測序64
• 4.2.5 測序數據整理和分析64
• 4.3 結果64-67
• 4.3.1 魚粉組和植物蛋白組表達基因的比較64-66
• 4.3.2 與攝食調控相關的差異表達基因66-67
• 4.4 討論67-70
• 4.5 結論70-71
• 參考文獻71-85
• 致謝85-86
• 作者簡歷86

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1 趙茹茜,韓正康,張崇理;攝食抑制時鵝血漿八肽膽囊收縮素樣免疫活性(CCK-8LI)的變化[J];南京農業(yè)大學學報;1992年02期

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1 劉艷;高植物蛋白飼料導致的花鱸攝食抑制分子調控機制的初步研究[D];中國海洋大學;2015年

  本文關鍵詞：高植物蛋白飼料導致的花鱸攝食抑制分子調控機制的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：314776