細胞自噬和胞吞是細胞進行正常生命活動所必須的生理程序,其活性受到諸多因素的影響。生長因子作為哺乳動物體內(nèi)的重要調(diào)節(jié)因子,可通過多種作用方式參與動物的卵泡發(fā)育、卵母細胞成熟及早期胚胎發(fā)育,但其對哺乳動物生殖相關(guān)細胞自噬及胞吞程序調(diào)控的相關(guān)研究目前仍十分少見。牦牛（Bos grunniens）作為高原地區(qū)重要經(jīng)濟畜種,其季節(jié)性發(fā)情、繁殖力低下的特征是牧區(qū)經(jīng)濟發(fā)展困難的主要原因之一,卵丘細胞緊緊圍繞卵母細胞生長,它自身的自噬和胞吞活動對卵泡發(fā)育及卵母細胞成熟具有重要作用。本研究選取牦牛卵丘細胞為研究對象,探究表皮生長因子（Epidermal gr owth factor,EGF）和胰島素樣生長因子-1（Insulin-like growth factor,IGF-1）對其自噬和胞吞活動的影響。使用濃度為0（對照組）、50、100、150、200 ng/mL的EGF和適宜濃度（10μmol/L）表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor,EGFR）抑制劑Gefitinib以及濃度為0（對照組）、50、100、150、200 ng/mL的IGF-1作用于牦... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

第二代牦牛卵丘細胞的生長形態(tài)(10×)

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文18圖1第二代牦牛卵丘細胞的生長形態(tài)(10×)Fig.1Growthpatternofthesecondgenerationyakcumuluscells(10×)2.2自噬相關(guān)蛋白Atg5、Beclin1、LC3在牦牛卵丘細胞中的分布免疫熒光結(jié)果顯示，Atg5、Beclin1、LC3蛋白在正常生長的牦牛卵丘細胞中均有表達，且主要在細胞質(zhì)表達，細胞核表達極弱。圖2細胞自噬相關(guān)蛋白在牦牛卵丘細胞的定位Fig.2Localizationofautophagy-associatedproteinsinyakcumuluscells紅色熒光為Atg5、Beclin1、LC3蛋白，藍色熒光為細胞核Redfluorescence:Atg5,Beclin1,LC3proteinrespectively;Bluefluorescence:cellnucleus2.3胞吞相關(guān)蛋白Cav1、Cav2在牦牛卵丘細胞中的分布免疫熒光結(jié)果顯示，Cav1、Cav2蛋白在正常生長的牦牛卵丘細胞中均有表達，細胞胞膜和胞質(zhì)均有分布，且細胞核表達極弱。

EGF與IGF-1對牦牛卵丘細胞自噬及胞吞相關(guān)蛋白表達的影響19圖3細胞胞吞相關(guān)蛋白在牦牛卵丘細胞的定位Fig.3Localizationofendocytosis-associatedproteinsinyakcumuluscells紅色熒光為Cav1和Cav2蛋白，藍色熒光為細胞核Redfluorescence:Cav1andCav2proteinrespectively;Bluefluorescence:cellnucleus3討論本試驗成功從牦牛卵巢中分離培養(yǎng)出原代牦牛卵丘細胞，為了試驗數(shù)據(jù)更加可靠有說服力，選取原代或第二代卵丘細胞進行后續(xù)試驗。故按溫度梯度凍存多余的細胞，置于液氮中以備使用。原代培養(yǎng)及傳代后的細胞均大小均勻，邊緣清晰、生長狀態(tài)良好，細胞質(zhì)量得以保證，可以作為試驗材料。使用間接免疫熒光法檢測自噬及胞吞相關(guān)蛋白在牦牛卵丘細胞中的分布，結(jié)果顯示Atg5、Beclin1、LC3、Cav1、Cav2蛋白在細胞中均有表達，其中自噬相關(guān)蛋白Atg5、Beclin1、LC3主要在細胞質(zhì)表達，說明在一般條件培養(yǎng)下的牦牛卵丘細胞內(nèi)也存在著一定水平的自噬活動，低水平的自噬可以幫助其分解體內(nèi)的代謝產(chǎn)物以供循環(huán)使用，促進細胞生長；小窩蛋白可在小窩內(nèi)陷形成胞吞小泡后隨小泡進入胞質(zhì)，胞吞蛋白Cav1、Cav2在質(zhì)膜和胞質(zhì)均有表達說明牦牛卵丘細胞中存在依賴于Cav1、Cav2蛋白的細胞內(nèi)吞作用，細胞通過這種方式進行物質(zhì)運輸和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。一定強度的自噬和胞吞可以幫助細胞維持胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)，促進其生長。4小結(jié)正常生長的牦牛卵丘細胞內(nèi)檢測到自噬和胞吞相關(guān)蛋白的表達，表達部位符合其功能特點。說明牦牛卵丘細胞存在一定強度的自噬和胞吞作用，幫助細胞維持穩(wěn)態(tài)促

【參考文獻】：
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本文編號：3142847