本文關(guān)鍵詞：柚抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的克隆與表達(dá)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：柚[Citrus maxima (Burm.) Merr.]為蕓香科柑橘屬植物,含有豐富的抗壞血酸(L-ascorbic acid, As A)即維生素C,食用價值極高。柚在果實(shí)發(fā)育過程中存在汁胞�；纳聿『�,嚴(yán)重影響了其食用品質(zhì)和商品價值�？箟难岽x途徑與汁胞�；嚓P(guān)的木質(zhì)素代謝途徑有密切聯(lián)系。本研究克隆了柚汁胞抗壞血酸生物合成相關(guān)酶基因,并以‘紅肉蜜柚’較易�；慕兄筒灰琢；倪h(yuǎn)中柱汁胞為材料,對這些基因進(jìn)行熒光定量分析,同時測定了抗壞血酸含量。主要研究結(jié)果如下：1.從柚汁胞中克隆得到了8個抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的開放閱讀框序列。其中所擴(kuò)增CmGMP基因的開放閱讀框片段大小為1086 bp,編碼361個氨基酸；所擴(kuò)增CmGME基因的開放閱讀框片段大小為1128 bp,編碼375個氨基酸；所擴(kuò)增CmGGP基因的開放閱讀框片段大小為1368 bp,編碼455個氨基酸：所擴(kuò)增CmGPP基因的開放閱讀框片段大小為892bp,編碼296個氨基酸；所擴(kuò)增CmGalDH基因的開放閱讀框片段大小為954 bp,編碼317個氨基酸；所擴(kuò)增CmGalLDH基因的開放閱讀框片段大小為1807bp,編碼601個氨基酸；所擴(kuò)增CmPME1基因的開放閱讀框片段大小為1748 bp,編碼582個氨基酸。所擴(kuò)增CmPG1基因的開放閱讀框片段大小為1337 bp,編碼445個氨基酸。這些抗壞血酸合成相關(guān)酶基因推導(dǎo)的氨基酸序列與其他植物的同源性都比較高。2.采用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測柚果實(shí)發(fā)育不同時期和不同部位的抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的表達(dá)水平,并測定了抗壞血酸含量。綜合試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析,較易�；慕兄虻谋磉_(dá)量和AsA含量都比不易粒化的遠(yuǎn)中柱汁胞低。隨著果實(shí)的發(fā)育,柚汁胞中CmGMP、CmPME1和CmGME基因的表達(dá)量逐漸升高,在花后170天表達(dá)量達(dá)到最高,然后逐漸降低。柚汁胞中CmGPP、CmGalLDH、CmPG1基因的表達(dá)量在果實(shí)發(fā)育前期沒有明顯變化(107天-147天),從花后147天表達(dá)量開始逐漸升高,在花后191天達(dá)到最大,然后逐漸降低。AsA含量先逐漸升高,在花后170天達(dá)到最大,然后逐漸降低,花后170天的汁胞中AsA含量是花后107天的3倍多。對兩個部位的AsA含量做獨(dú)立樣本T檢驗(yàn),在花后117天以后,兩者呈顯著性差異(P0.05)。CmGMP、CmGME、CmGPP、CmGalLDH、 CmPME1、CmPG1等基因的表達(dá)量與AsA含量的變化趨勢存在一定的一致性,特別是CmGMP、CmPME1和CmGME基因的表達(dá)量與AsA含量具有顯著相關(guān)性。L-半乳糖途徑可能在柚抗壞血酸生物合成中占主要地位,D-半乳糖醛酸途徑也可能起到一定作用,兩種途徑可能相互并存。
【關(guān)鍵詞】：紅肉蜜柚 抗壞血酸 汁胞�；� 開放閱讀框 熒光定量
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S666.3
【目錄】：

• 縮略詞8-9
• 摘要9-11
• abstract11-13
• 第一章 引言13-19
• 1 研究背景13-14
• 2 抗壞血酸合成相關(guān)研究進(jìn)展14-15
• 3 抗壞血酸合成相關(guān)酶基因調(diào)控研究進(jìn)展15-18
• 3.1 L-半乳糖途徑相關(guān)酶基因調(diào)控研究進(jìn)展15-17
• 3.2 D-半乳糖醛酸途徑相關(guān)酶基因調(diào)控研究進(jìn)展17-18
• 4 研究目的和意義18-19
• 第二章 柚抗壞血酸含量的測定19-23
• 1 材料與方法19
• 1.1 材料19
• 1.2 儀器與試劑19
• 1.3 方法19
• 1.3.1 樣品的前處理19
• 1.3.2 流動相的配置19
• 1.3.3 高效液相色譜條件19
• 2 結(jié)果與分析19-23
• 2.1 流動相比例的優(yōu)化19-20
• 2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及相關(guān)性20-21
• 2.3 柚不同時期和不同部位抗壞血酸含量分析21-23
• 第三章 柚抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的克隆和分析23-53
• 1 材料與方法23-26
• 1.1 材料23
• 1.2 儀器和試劑23
• 1.3 方法23-26
• 1.3.1 柚汁胞總RNA的提取、檢測及cDNA第一鏈的合成23
• 1.3.2 引物設(shè)計23-24
• 1.3.3 柚抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的克隆24-25
• 1.3.4 柚抗壞血酸合成相關(guān)酶基因序列生物信息學(xué)分析25-26
• 2 結(jié)果與分析26-53
• 2.1 CmGMP基因的克隆26-29
• 2.1.1 CmGMP基因ORF的克隆與GMP氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析26-28
• 2.1.2 CmGMP蛋白理化性質(zhì)預(yù)測與分析28
• 2.1.3 CmGMP蛋白跨膜結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位預(yù)測與分析28-29
• 2.2 CmGME基因的克隆29-32
• 2.2.1 CmGME基因ORF的克隆與GME氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析29-31
• 2.2.2 CmGME蛋白理化性質(zhì)預(yù)測與分析31-32
• 2.2.3 CmGME蛋白跨膜結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位預(yù)測與分析32
• 2.3 CmGGP基因的克隆32-35
• 2.3.1 CmGGP基因ORF的克隆與GGP氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析32-34
• 2.3.2 CmGGP蛋白理化性質(zhì)預(yù)測與分析34-35
• 2.3.3 CmGGP蛋白跨膜結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位預(yù)測與分析35
• 2.4 CmGPP基因的克隆35-38
• 2.4.1 CmGPP基因ORF的克隆與GPP氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析35-37
• 2.4.2 CmGPP蛋白理化性質(zhì)預(yù)測與分析37
• 2.4.3 CmGPP蛋白跨膜結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位預(yù)測與分析37-38
• 2.5 CmGalDH基因的克隆38-41
• 2.5.1 CmGalDH基因ORF的克隆與Ga1DH氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析38-40
• 2.5.2 CmGalDH蛋白理化性質(zhì)預(yù)測與分析40
• 2.5.3 CmGalDH蛋白跨膜結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位預(yù)測與分析40-41
• 2.6 CmGalLDH基因的克隆41-45
• 2.6.1 CmGalLDH基因ORF的克隆與GPP氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析41-44
• 2.6.2 CmGalLDH蛋白理化性質(zhì)預(yù)測與分析44-45
• 2.6.3 CmGalLDH蛋白跨膜結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位預(yù)測與分析45
• 2.7 CmPME1基因的克隆45-49
• 2.7.1 CmPME1基因ORF的克隆與PME氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析45-48
• 2.7.2 CmPME1蛋白理化性質(zhì)預(yù)測與分析48
• 2.7.3 CmPME1蛋白跨膜結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位預(yù)測與分析48-49
• 2.8 CmPG1基因的克隆49-53
• 2.8.3 CmPG1基因ORF的克隆與PG氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析49-51
• 2.8.4 CmPG1蛋白理化性質(zhì)預(yù)測與分析51-52
• 2.8.5 CmPG1蛋白跨膜結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位預(yù)測與分析52-53
• 第四章 柚抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的表達(dá)分析53-60
• 1 材料與方法53-55
• 1.1 材料53
• 1.2 儀器和試劑53
• 1.3 方法53-55
• 1.3.1 柚汁胞總RNA的提取53
• 1.3.2 cDNA的合成53
• 1.3.3 熒光定量PCR53-55
• 2 結(jié)果與分析55-60
• 2.1 柚果實(shí)發(fā)育不同時期抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的表達(dá)分析55-60
• 2.1.1 柚果實(shí)發(fā)育不同時期CmGMP基因的表達(dá)分析55-56
• 2.1.2 柚果實(shí)發(fā)育不同時期CmGME基因的表達(dá)分析56
• 2.1.3 柚果實(shí)發(fā)育不同時期CmGGP基因的表達(dá)分析56
• 2.1.4 柚果實(shí)發(fā)育不同時期CmGPP基因的表達(dá)分析56-57
• 2.1.5 柚果實(shí)發(fā)育不同時期CmGalDH基因的表達(dá)分析57
• 2.1.6 柚果實(shí)發(fā)育不同時期CmGalLDH基因的表達(dá)分析57-58
• 2.1.7 柚果實(shí)發(fā)育不同時期CmPME1基因的表達(dá)分析58-59
• 2.1.8 柚果實(shí)發(fā)育不同時期CmPG1基因的表達(dá)分析59-60
• 第五章 討論60-64
• 1 抗壞血酸合成相關(guān)酶基因生物信息學(xué)分析及意義60
• 2 抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的表達(dá)與抗壞血酸含量的關(guān)系60-64
• 第六章 總結(jié)64-65
• 參考文獻(xiàn)65-72
• 致謝72

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1 劉志發(fā);柚抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的克隆與表達(dá)研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：柚抗壞血酸合成相關(guān)酶基因的克隆與表達(dá)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：311690