MYB轉(zhuǎn)錄因子存在于所有真核生物中,其家族成員數(shù)量龐大、功能多樣。MYB類轉(zhuǎn)錄因子廣泛調(diào)控類黃酮合成代謝,在植物果實(shí)品質(zhì)調(diào)控及抗病性中發(fā)揮作用。甜瓜（Cucumis melo L.）品種為河套蜜瓜是內(nèi)蒙古西部地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)作物,本論文選取在甜瓜果實(shí)成熟期高表達(dá)的CmMYBL基因轉(zhuǎn)化甜瓜,在轉(zhuǎn)基因果實(shí)中類黃酮含量發(fā)生顯著變化,說明CmMYBL基因?qū)μ鸸项慄S酮的合成具有促進(jìn)作用。主要研究結(jié)果如下:（1）根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果選取果實(shí)成熟期高表達(dá)的兩個CmMYBL基因進(jìn)行實(shí)時定量PCR檢測,檢測所得結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)基本吻合�？寺〉玫紺mMYBL-1和CmMYBL-2兩個基因的cDNA序列,長度分別為564bp和714bp。運(yùn)用生物信息學(xué)對CmMYBL-1、CmMYBL-2蛋白的理化性質(zhì)、信號肽、磷酸化位點(diǎn)、跨膜結(jié)構(gòu)域、二級結(jié)構(gòu)等作出預(yù)測,結(jié)果顯示,CmMYBL-1、CmMYBL-2均屬于不穩(wěn)定的酸性親水蛋白,兩個蛋白均無信號肽,不屬于分泌型蛋白。（2）檢測了CmMYBL-1、CmMYBL-2兩個基因在甜瓜各個組織、果實(shí)各個發(fā)育階段的表達(dá)特性。兩基因均在果實(shí)中的表達(dá)量最高,花和根中表達(dá)量次之,... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MYB轉(zhuǎn)錄因子家族示意圖

內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文5圖1.2類黃酮生物合成途徑[71]Fig.1.2Flavonoidbiosyntheticpathway1.3生物信息學(xué)1985年，被譽(yù)為生命科學(xué)的“登月計劃”的人類基因組計劃被首次提出。這是一項(xiàng)由中國、法國、日本、美國、德國、英國科學(xué)家共同參與的規(guī)模極其宏大的跨國跨學(xué)科的科學(xué)探索工程。該計劃旨在揭開組成人體2.5萬個基因的30億個堿基對的秘密，達(dá)到破譯人類遺傳信息的最終目的。人類基因組計劃于1990年正式啟動并于2005年完成。隨著人類基因組計劃的完成，更多物種基因組計劃也在陸續(xù)啟動并一步步實(shí)施，由此衍生的大數(shù)據(jù)內(nèi)容交叉錯綜復(fù)雜，單單由生物學(xué)角度的研究已經(jīng)滿足不了對核酸及蛋白質(zhì)序列的大數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比對的要求，由此，生物信息學(xué)作為運(yùn)用計算機(jī)結(jié)合生物學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、數(shù)學(xué)等多門學(xué)科的新型交叉學(xué)科應(yīng)運(yùn)而生。其以核酸及蛋白序列為基礎(chǔ)，對各物種基因組計劃研究而得的大數(shù)據(jù)及衍生數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、處理、儲存、分配、檢索、解釋、分析及預(yù)測[72，73]。隨著人類研究的不斷深入，生物信息學(xué)經(jīng)歷了前基因組、基因組和后基因組三個時代[74]，每個時期研究的領(lǐng)域側(cè)重點(diǎn)都不同，目前研究內(nèi)容大體分為6個部分：（1）生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫的建立并對外公開查詢。數(shù)據(jù)庫的不斷擴(kuò)充和更新完善，為更多科研人員研究提供便利，

內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文13圖2.1超表達(dá)載體構(gòu)建Fig.2.1Constructionofoverexpressionvector2.2.4.4篩選陽性轉(zhuǎn)化子使用北京百泰克生物技術(shù)有限公司的高純質(zhì)粒小量制備試劑盒提取質(zhì)粒，以空質(zhì)粒pPZP221為對照，PCR檢測篩選陽性重組質(zhì)粒。方法同2.2.2.4。陽性質(zhì)粒分別命名為pPZP221-CmMYBL-1、pPZP221-CmMYBL-2。2.2.4.5酶切驗(yàn)證建立25μL反應(yīng)體系：重組質(zhì)粒2μL，10×QBuffer2.5μL，限制性內(nèi)切酶XbaⅠ、KpnⅠ各0.5μL，ddH2O補(bǔ)至終體積25μL，將反應(yīng)液混勻，置于37°C水浴反應(yīng)80min。酶切產(chǎn)物使用1.0%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行電泳驗(yàn)證。2.2.5構(gòu)建RNAi載體2.2.5.1RNAi中間載體正向片段的構(gòu)建（1）RNAi正向片段的PCR擴(kuò)增建立50μLRNAi正向片段擴(kuò)增體系如表2.3：表2.3RNAi正向片段擴(kuò)增體系Table2.3RNAipositivefragmentamplificationsystem試劑體積模板cDNA200ng5×PrimeSTARGXLBuffer10μL上游引物（5μmol/L）4μL下游引物（5μmol/L）dNTPMixture（2.5mmol/L）4μL4μL

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]植物MYB轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控苯丙烷類生物合成研究[J]. 穆紅梅,杜秀菊,張秀省,張敏,曹興.  北方園藝. 2015(24)
[3]調(diào)控植物類黃酮生物合成的MYB轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展[J]. 邢文,金曉玲.  分子植物育種. 2015(03)
[4]Cloning and Expression of Two MYB Transcription Factors in Tea Plant（Camellia sinensis）[J]. Ma Chunlei,Yao Mingzhe,Wang Xinchao,Jin Jiqiang,Chen Liang.  Chinese Forestry Science and Technology. 2012(03)
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[6]植物Myb轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展[J]. 陳清,湯浩茹,董曉莉,侯艷霞,羅婭,蔣艷,黃瓊瑤.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2009(02)
[7]蛋白質(zhì)磷酸化修飾的研究進(jìn)展[J]. 姜錚,王芳,何湘,劉大偉,陳宣男,趙紅慶,黃留玉,袁靜.  生物技術(shù)通訊. 2009(02)
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[9]植物MYB類轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展[J]. 陳俊,王宗陽.  植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報. 2002(02)
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博士論文
[1]水稻OsOFP轉(zhuǎn)錄因子家族基因克隆與功能分析[D]. 于慧.吉林大學(xué) 2015

碩士論文
[1]擬南芥SPO11基因的生物信息學(xué)分析[D]. 謝冰心.鄭州大學(xué) 2014
[2]大豆2R-MYB轉(zhuǎn)錄因子基因GmMYB038功能初探[D]. 楊思思.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]沙漠逆境下蘆葦?shù)鞍踪|(zhì)親/疏水性變化的機(jī)制[D]. 施璐.首都師范大學(xué) 2009



本文編號：3099111