本文關(guān)鍵詞：海南金菠蘿心腐病致病菌的分離鑒定及生防效應(yīng)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：菠蘿心腐病是造成菠蘿減產(chǎn)的主要病害因素之一。防治措施一般是使用化學農(nóng)藥,但由于化學農(nóng)藥大量與長期使用會導致病菌的抗性增強和引起食品安全等問題。生物防治作為環(huán)保、安全的病害防治途徑,篩選并研發(fā)針對菠蘿心腐病害的新型殺菌劑成為當務(wù)之急。本研究從海南省樂東縣心腐病發(fā)病嚴重的菠蘿園中分離到一株致病菌-煙草疫霉-為目標菌株,分離篩選出對病原菌有較強拮抗作用的微生物,將篩選獲得的拮抗菌與腐熟有機肥二次發(fā)酵,探究拮抗菌制成的生物有機肥對菠蘿心腐病的防治效果,以期為菠蘿心腐病的生物防治提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： (1)從海南樂東萬鐘農(nóng)場金菠蘿心腐病發(fā)病植株分離到一株致病菌,采用柯赫氏法則對其致病性進行了回接驗證,經(jīng)18S rDNA序列分子測序并結(jié)合形態(tài)分析,鑒定該致病菌為煙草疫霉。該病菌菌絲生長最適宜的條件為pH6,溫度25℃左右,Ca2+離子濃度在1-4g/L之間,V8汁瓊脂和燕麥瓊脂培養(yǎng)基最適合菠蘿心腐病原菌菌絲的生長。 (2)從高發(fā)病地塊的健康菠蘿地、香蕉園等土壤中采集到31份土樣,通過平板稀釋分離得到224株細菌,以分離到的菠蘿心腐病菌為對象,利用平板對峙法篩選到2株具有強拮抗功能的細菌,菌株編號為HL2、HL3,經(jīng)鑒定,HL2菌株屬于枯草芽孢桿菌,HL3菌株為鏈霉菌。抑菌試驗結(jié)果表明這兩株拮抗菌對菠蘿心腐病病菌菌絲生長的抑制率分別為71.6%和53.3%,對病菌產(chǎn)孢子囊的抑制率分別為83.3%、61.7%；拮抗菌培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的揮發(fā)性抑菌物質(zhì)能明顯抑制病原菌菌絲的生長,提取HL2拮抗菌發(fā)酵液中的抑菌物質(zhì)并用液-質(zhì)聯(lián)用儀進行分析表明該抑菌物質(zhì)主要是表面活性素(surfactin)和伊枯草菌素(iturin)。 (3)利用篩選出來的拮抗菌HL2和HL3與有機肥二次發(fā)酵制成生物有機肥B102和B103,采用高發(fā)病土進行金菠蘿盆栽試驗,結(jié)果表明B102不但能明顯促進菠蘿的生長,并且可以降低菠蘿心腐病的發(fā)病率,其相對防效為73.5%。 (4)對施用生物有機肥(BIO2)的菠蘿盆栽土壤可培養(yǎng)微生物的分析結(jié)果表明,施用B102菠蘿苗根際土中細菌和放線菌數(shù)量顯著高于對照處理(施用普通有機肥),真菌的數(shù)量低于對照。用DGGE分析土壤中微生物多樣性表明,與對照相比,施用B102提高了菠蘿根際土中的細菌數(shù)量和種類、均勻度指數(shù)、豐富度、辛普森指數(shù)、真菌的的均勻度,但是降低了土壤真菌的種類和數(shù)量。
【關(guān)鍵詞】：菠蘿心腐病 煙草疫霉 拮抗菌 生物有機肥 微生物多樣性
【學位授予單位】：海南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S436.68
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 1. 引言9-17
• 1.1 菠蘿心腐病的概述9-10
• 1.2 菠蘿心腐病的防治概況10-14
• 1.2.1 抗、耐病品種的選育10-11
• 1.2.2 藥劑防治11
• 1.2.3 農(nóng)業(yè)防治11-12
• 1.2.4 生物防治12-14
• 1.3 拮抗微生物的防控機理14-16
• 1.3.1 拮抗作用14-15
• 1.3.2 競爭作用15
• 1.3.3 誘導抗性作用15
• 1.3.4 重寄生作用15-16
• 1.4 本研究的目的與意義16
• 1.5 本研究的技術(shù)路線16-17
• 2 材料與方法17-25
• 2.1 菠蘿心腐病病原菌的分離、致病性驗證及鑒定17-19
• 2.1.1 樣品的采集17
• 2.1.2 供試植株17
• 2.1.3 菠蘿心腐病病原菌的分離與致病性驗證17
• 2.1.4 菠蘿心腐病病原菌的保存與鑒定17-18
• 2.1.5 菠蘿心腐病病原菌的生長條件測定18-19
• 2.2 菠蘿心腐病拮抗菌的分離篩選與鑒定19-21
• 2.2.1 土壤樣品的采集19
• 2.2.2 土壤細菌的分離與純化19
• 2.2.3 拮抗菌的篩選19
• 2.2.4 拮抗菌對菠蘿心腐病菌的抑制活性測定19-20
• 2.2.5 拮抗菌的鑒定20-21
• 2.3 拮抗菌HL2脂肽類物質(zhì)的分離方法與分析條件21-22
• 2.3.1 脂肽類抑菌物質(zhì)的提取與保存方法21
• 2.3.2 脂肽類抑菌物質(zhì)的測定與分析條件21-22
• 2.4 生物有機肥對菠蘿心腐病害的盆栽防控設(shè)計22-23
• 2.4.1 試驗材料22
• 2.4.2 盆栽試驗設(shè)計22
• 2.4.3 統(tǒng)計方法22-23
• 2.5 盆栽菠蘿根際土壤微生物多樣性的測定23-25
• 2.5.1 土壤樣品的采集23
• 2.5.2 根際土中可培養(yǎng)微生物數(shù)量的測定23
• 2.5.3 土壤總DNA的提取23
• 2.5.4 細菌16S rDNA和真菌18S rDNA基因序列的擴增23-24
• 2.5.5 變性梯度凝膠電泳(DGGE)24-25
• 3 結(jié)果與分析25-43
• 3.1 菠蘿心腐病病原菌的分離鑒定25-29
• 3.1.1 菠蘿心腐病病原菌的分離25
• 3.1.2 菠蘿心腐病病原菌的鑒定結(jié)果25-27
• 3.1.3 菠蘿心腐病病原菌菌絲的生長適宜條件27-29
• 3.2 菠蘿心腐病菌拮抗菌的分離、篩選及鑒定29-33
• 3.2.1 菠蘿心腐病菌拮抗菌的分離29-30
• 3.2.2 菠蘿心腐病拮抗菌的篩選30
• 3.2.3 拮抗菌對心腐病病菌抑制能力的測定30-32
• 3.2.4 拮抗菌的鑒定結(jié)果32-33
• 3.3 HL2拮抗菌脂肽類物質(zhì)的測定結(jié)果33-35
• 3.4 生物有機肥對菠蘿心腐病的防效及對土壤微生物多樣性的影響35-43
• 3.4.1 生物有機肥對盆栽菠蘿植株發(fā)病率的影響35-36
• 3.4.2 生物有機肥對菠蘿生長的影響36-37
• 3.4.3 生物有機肥對菠蘿根際土壤微生物數(shù)量的影響37
• 3.4.4 生物有機肥對菠蘿盆栽根際土壤微生物多樣性的影響37-43
• 4 討論43-45
• 4.1 菠蘿心腐病病原菌43
• 4.2 菠蘿心腐病的生物防治及機理43-45
• 4.2.1 脂肽類物質(zhì)43-44
• 4.2.2 生物防治機理44-45
• 5 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-51
• 附錄一 實驗所用培養(yǎng)基51
• 附錄二 拮抗菌HL2菌株16Sr DNA序列51-52
• 附錄三 拮抗菌HL3菌株16Sr DNA序列52-53
• 致謝53

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  本文關(guān)鍵詞：海南金菠蘿心腐病致病菌的分離鑒定及生防效應(yīng)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：309895