哺乳動物精子發(fā)生是一個復雜而精密的過程,由很多基因參與調(diào)控,對雄性動物的繁殖性能具有重要影響。磷酸甘油酸變位酶1（phosphoglycerate mutase 1,PGAM1）和磷酸丙糖異構(gòu)酶1（triosephosphate isomerase 1,TPI1）是糖酵解代謝過程中的關鍵酶。睪丸支持細胞可通過糖酵解途徑為生精細胞的發(fā)育提供能量底物。因而探究PGAM1和TPI1基因在雄性藏綿羊生殖器官中的表達及生物學功能對深入理解其調(diào)控機制具有重要的意義。本實驗以性成熟前（3月齡）、性成熟（1歲）和成年（3歲）3個較為關鍵發(fā)育期的雄性藏綿羊生殖器官作為試驗材料,克隆了PGAM1和TPI1基因的完整CDS區(qū)序列,進行生物信息學分析;采用qRT-PCR和Western blot方法從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平檢測了藏綿羊生殖器官中PGAM1和TPI1 mRNA和蛋白表達量,運用免疫組織化學染色法檢測PGAM1和TPI1蛋白在不同年齡藏綿羊睪丸和附睪組織內(nèi)表達定位,初步探究了PGAM1和TPI1對雄性藏綿羊生殖器官中的影響。主要研究結(jié)果如下:1.藏綿羊PGAM1基因CDS區(qū)全長為765 bp,可編碼254... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

哺乳動物睪丸支持細胞糖酵解代謝通路Figure1-1GlycolysispathwayintesticularSertolicellsofmammals

，PTU）誘導的甲狀腺功能減退癥的小鼠睪丸中，葡糖糖的攝入量，GLUT3和GLUT8的表達量，LDH的活性及睪丸內(nèi)乳酸的濃度均明顯降低，生殖細胞的凋亡率增加，增殖率降低。說明患甲狀腺功能減退癥的性成熟前小鼠睪丸內(nèi)通過增加氧化應激（抑制糖酵解過程）來影響生殖細胞的存活和增殖。Verma和Krishna[31]的研究結(jié)果表明，由來曲唑誘導的小鼠睪丸中E濃度的下降可能導致胰島素受體（Insulinreceptor，IR）表達水平下降，進而降低了睪丸內(nèi)葡萄糖的轉(zhuǎn)運速度，經(jīng)糖酵解產(chǎn)生的乳酸量降低，細胞的增殖率和存活率下降，凋亡率增加。圖1-2差異表達蛋白的KEGG富集結(jié)果Figure1-2ResultsofKEGGenrichmentofthedifferentiallyexpressedproteins2磷酸甘油酸變位酶2.1磷酸甘油酸變位酶糖酵解是生物體中糖氧化分解三大途徑之一。糖酵解通過多種催化酶（醛縮

藏綿羊PGAM1和TPI1基因的克隆及在雄性生殖器官中的表達13軟件進行核苷酸和氨基酸序列同源性比對分析。利用MEGA7.0軟件繪制系統(tǒng)發(fā)生樹，其中氨基酸比對及進化樹構(gòu)建中各物種氨基酸序列均來自NCBI數(shù)據(jù)庫。2結(jié)果與分析2.1PGAM1和TPI1基因PCR擴增結(jié)果藏綿羊PGAM1和TPI1基因的RT-PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，獲得了與預期擴增片段大小相符的特異性目的片段(圖2-1)。克隆得到了片段長度分別為765bp和861bp的核苷酸序列。圖2-1PGAM1和TPI1基因的PCR檢測結(jié)果Figure2-1PCRamplificationofPGAM1andTPI1geneM:DNALadder2000Marker(5μL);1~2:PGAM1；3~4:TPI12.2生物信息學分析經(jīng)Blast比對發(fā)現(xiàn)，PGAM1與用于設計克隆引物的序列的相似度為99.74%（第132位堿基T→G，第708位堿基A→G）（圖2-2）；TPI1與用于設計克隆引物的序列的相似度為99.88%（第833位堿基C→T）（圖2-3），且均為同義突變。通過NCBI數(shù)據(jù)庫中的ORFFinder在線軟件分析發(fā)現(xiàn)，在PGAM1克隆序列中存在一個最長的ORF區(qū)（1-765bp）；藏綿羊PGAM1基因的CDS區(qū)全長為765bp，編碼254個氨基酸（起始密碼子為ATG，終止密碼子為TGA）；TPI1基因

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]Dmrt1/7和Boule/Dazl在綿羊睪丸中的表達與定位[D]. 李討討.甘肅農(nóng)業(yè)大學 2018
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本文編號：3090486