發(fā)布時(shí)間：2021-03-01 05:30

　　小麥?zhǔn)俏覈闹饕Z食作物之一,其在全世界范圍內(nèi)也被廣泛種植。干旱、鹽漬等非生物逆境嚴(yán)重阻礙小麥生產(chǎn)的進(jìn)一步發(fā)展。挖掘利用抗逆基因,培育突破性品種是提升小麥產(chǎn)量的有效途徑。在前期研究中將來自玉米的ZmTINY2基因通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化到小麥F25-2中、將來自擬南芥的AtNACL1基因通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化到小麥Fielder中,分別獲得了過表達(dá)外源基因的轉(zhuǎn)基因小麥。擬對獲得轉(zhuǎn)基因材料進(jìn)行鑒定、模擬鹽害、干旱分析等,然后進(jìn)一步分析這兩個(gè)基因?qū)}害、干旱等逆境脅迫的抗性。所得結(jié)果如下:（1）轉(zhuǎn)基因材料的鑒定將收獲的過表達(dá)外源基因的小麥T₂代種子進(jìn)行加代,待T₂代轉(zhuǎn)基因小麥長至20-30cm左右提DNA鑒定。共鑒定轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥91株,其中73株為陽性;鑒定轉(zhuǎn)AtNACL1基因小麥255株,其中232株為陽性。（2）轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥抗鹽、旱性鑒定用不同濃度NaCl和PEG-6000溶液培養(yǎng)轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥和F25-2小麥種子7天,通過測量發(fā)芽勢、發(fā)芽率、根長、苗長、鮮重等發(fā)現(xiàn),與對照相比,轉(zhuǎn)ZmTINY2基因株系在15%PEG溶... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥材料的鑒定M：marker；1-22：轉(zhuǎn)基因材料；23：陰性對照小麥F25-2；W：ddH2O

過表達(dá)ZmTINY2和AtNACL1基因小麥的耐鹽及抗旱性分析20上結(jié)果表明，ZmTINY2基因在小麥F25-2中過表達(dá)有利于促進(jìn)其在干旱脅迫下的種子萌發(fā)。圖2不同濃度PEG處理轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥發(fā)芽勢（左）和發(fā)芽率（右）比較XC318、NC335：轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥；CK：陰性對照小麥F25-2注：柱形圖上不同字母表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著性（P<0.05）（LSD–Duncan方法）（下同）Fig.2Comparisonofgerminationpotential(left)andgerminationrate(right)intransgenicZmTINY2wheattreatedwithdifferentconcentrationsofPEGXC318、NC335:TransgenicZmTINY2wheat;CK:NegativecontrolwheatF25-2Note:Differentlettersabovethebarsindicatedstatisticallysignificantdifferences(P<0.05)(LSD–Duncanmethod)（Thesamebelow）（2）不同濃度PEG溶液處理轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥苗長、根長、地上部分鮮重、地下部分鮮重統(tǒng)計(jì)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，小麥轉(zhuǎn)基因株系和對照的平均苗長、根長、地上和地下部分鮮重都隨PEG濃度的升高而降低（表3），但在同一濃度PEG處理下，轉(zhuǎn)基因株系的某些性狀要高于對照。平均苗長統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，在未處理?xiàng)l件下，小麥轉(zhuǎn)ZmTINY2基因株系XC318、NC335和陰性對照F25-2的平均苗長相差不大，都在12cm左右。在5%PEG溶液處理下，XC318、NC335和對照的平均苗長分別為12.45cm、12.84cm、10.5cm；在10%PEG溶液處理下，XC318、NC335和對照的平均苗長分別為10.25cm、10.20cm、8.97cm；在15%PEG溶液處理下，XC318、NC335和對照的平均苗長分別為5.75cm、7.67cm、4.36cm；在20%PEG溶液處理下，XC318、NC335和對照的平均苗長分別為2.04cm、1.97cm、0.74cm。由此看出，在不同濃度PEG處理下，XC318、NC335的平均苗長都要高于對照F25-2，且差異性顯著。平均根長統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，在未處理?xiàng)l件

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文23圖3轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥苗期模擬干旱處理0天（左）和處理7天（右）表型XC318、NC335：轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥；CK：陰性對照小麥F25-2Fig.3ThephenotypeoftransgenicZmTINY2wheatseedlingstagesimulateddroughttreatmentfor0(left)and7days(right)XC318、NC335:transgenicZmTINY2wheat;CK:NegativecontrolwheatF25-2（1）干旱對小麥葉片葉綠素含量的影響處理前小麥轉(zhuǎn)ZmTINY2基因株系XC318、NC335與對照小麥F25-2葉片所含葉綠素含量相差不大（圖4），都在9.2mg·g-1FW左右。經(jīng)15%PEG水溶液處理7天后，由于受到水分脅迫的影響，小麥葉片的葉綠素含量都有所降低，XC318、NC335和對照的葉綠素含量分別為8.2、8.4、7.7mg·g-1FW，由此看出，小麥轉(zhuǎn)ZmTINY2基因株系葉綠素含量較高，且與對照差異顯著。圖4轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥苗期模擬干旱處理前后葉綠素含量比較XC318、NC335：轉(zhuǎn)ZmTINY2基因小麥；CK：陰性對照小麥F25-2Fig.4ComparisonofchlorophyllcontentintransgenicZmTINY2wheatseedlingsbeforeandafterdroughttreatmentXC318、NC335:TransgenicZmTINY2wheat;CK:NegativecontrolwheatF25-2（2）干旱對小麥葉片抗氧化酶活性的影響通過抗氧化酶活性比較（圖5）發(fā)現(xiàn)，用15%PEG水溶液模擬干旱處理之前，小麥轉(zhuǎn)ZmTINY2基因株系XC318、NC335和對照F25-2的SOD、POD、CAT活性大小相差不大，SOD活性在156U·g-1FW左右，POD活性在5700U·g-1FW·min-1左右，CAT活性在58U·g-1FW·min-1左右。處理后，小麥轉(zhuǎn)ZmTINY2基因株系XC318、NC335和陰性

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本文編號：3057018