豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是一種由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）而引起的高度傳染性疾病,該疾病會造成母豬繁殖障礙和仔豬肺炎、生長發(fā)育緩慢、死亡率增加。PRRSV具有抗原變異性、嗜巨噬細(xì)胞性、抗體依賴性增強作用以及持續(xù)性感染等特點,能夠抑制或逃逸宿主的先天性免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)的抵御。而目前市場開發(fā)的傳統(tǒng)PRRSV疫苗無法提供有效保護,至今仍無切實有效的治療措施。因此開發(fā)能夠作用不同PRRSV毒株,為豬群提供廣泛保護的抗病毒策略已成為當(dāng)前PRRSV防控面臨的重大挑戰(zhàn)。微小核糖核酸（microRNA,miRNA）是一類長度為18²3 nt的單鏈非編碼小RNA,是一種能夠在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)的內(nèi)源性調(diào)節(jié)因子。許多研究證實microRNA在PRRSV感染宿主細(xì)胞的過程中,通過靶向調(diào)控病毒受體的表達(dá)參與病毒與宿主互作機制,發(fā)揮著調(diào)控病毒感染及宿主免疫應(yīng)答的重要作用。已有研究發(fā)現(xiàn),CD163是病毒感染宿主的關(guān)鍵受體。本研究將利用生物信息學(xué)方法,以PRRSV的細(xì)胞受體C... 

【文章來源】：南陽師范學(xué)院河南省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

豬源CD163 3"UTR區(qū)域

(2)猴源CD163 3"UTR序列如下圖2-3所示。對于miRNAs在猴源CD163 3"UTR結(jié)合位點的預(yù)測如圖2-3所示,克隆測序252 bp的猴源CD163 3"UTR與miR-124a結(jié)合的靶位點位于31至36 bp處,與miR-124a種子區(qū)域結(jié)合的自由能為:-22.2 kcal/mol;miR-143-3p的靶位點位于129至132 bp處,與miR-143-3p種子區(qū)域結(jié)合的自由能為:-19.4 kcal/mol;miR-338的靶位點位于117至120bp處,與miR-338種子區(qū)域結(jié)合的自由能為:-22.0 kcal/mol;miR-450b-3p的靶位點位于86至89 bp處,與miR-450b-3p種子區(qū)域結(jié)合的自由能為:-20.9 kcal/mol。miR-124a種子區(qū)域與猴源CD163 3"UTR結(jié)合的自由能為最小。

將豬源psiCHECK-2-pCD163-WT(野生型)重組質(zhì)粒和猴源psiCHECK-2-mCD163-WT(野生型)重組質(zhì)粒與4個miRNAs共同轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,以轉(zhuǎn)染NC模擬物的細(xì)胞作為對照組,進行雙熒光素酶活性檢測。結(jié)果如圖2-4所示,四個miRNAs均能抑制重組質(zhì)粒的熒光素酶活性,其中miR-124a的抑制效果較為顯著,對psiCHECK-2-pCD163-WT重組質(zhì)粒的抑制效果達(dá)到61%,與psiCHECK-2-mCD163-WT重組質(zhì)粒的抑制效果達(dá)到40.6%。而miR-143-3p、miR-338、miR-450b-3p也均可與猴源和豬源的CD163 3"UTR野生型序列發(fā)生結(jié)合,但熒光素酶相對表達(dá)量均高于miR-124a。因此,特選用miR-124a為后期實驗研究對象。2.4.2.3雙熒光素酶報告基因檢測miRNA與受體CD163 3"UTR的結(jié)合位點

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本文編號：3030973