大豆（Glycine max）是一種重要的糧食和經(jīng)濟(jì)作物,是植物油脂和蛋白的重要來源,在人民生活以及國民經(jīng)濟(jì)中具有重要的地位。近年來,我國大豆進(jìn)口依存度居高不下,產(chǎn)業(yè)安全面臨危機(jī)和挑戰(zhàn),在此背景下,分離生物及非生物脅迫抗性功能基因,明確其遺傳關(guān)系及分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò),進(jìn)而利用分子設(shè)計(jì)育種培育高產(chǎn)耐逆的大豆優(yōu)良品種顯得尤為重要。NAC類轉(zhuǎn)錄因子是植物特有的轉(zhuǎn)錄因子家族,己發(fā)現(xiàn)大量NAC類轉(zhuǎn)錄因子能夠通過直接轉(zhuǎn)錄調(diào)控脅迫相關(guān)基因的表達(dá)參與植物脅迫響應(yīng),調(diào)控植株耐逆性,成為植物非生物脅迫和生物脅迫耐逆性改良的有效靶點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)室之前通過大豆鹽脅迫下的轉(zhuǎn)錄譜分析獲得了一個(gè)鹽誘導(dǎo)型大豆NAC轉(zhuǎn)錄因子基因GmSIN2,發(fā)現(xiàn)其過表達(dá)轉(zhuǎn)基因大豆在田間產(chǎn)量性狀及耐鹽性顯著優(yōu)于對(duì)照,為了進(jìn)一步研究其在大豆脅迫耐受性中的功能和作用機(jī)制,通過酵母cDNA文庫篩選得到GmSIN2的候選互作蛋白GmNIW（NACInteractive WD40protein）,后者編碼WD40蛋白,其功能在大豆中尚屬未知。在此基礎(chǔ)上,本論文以GmSIN2和GmNIW為研究對(duì)象,進(jìn)行了以下研究并獲得了相應(yīng)的結(jié)果:1.確認(rèn)GmSIN2和GmN... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１?ＮＡＣ蛋白的結(jié)構(gòu)［４］??Ｆｉｇ?１．１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＮＡＣ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ＾４】??９??

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???ＧｍＮＩＷ－ＧＦＰ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??Ｂａｒ＝２０?ｐｍ??圖３．５?ＧｍＮＩＷ－ＧＦＰ亞細(xì)胞定位??Ｆｉｇｕｒｅ?３．５?ＧｍＮＩＷ－ＧＦＰ?ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ??將農(nóng)桿菌注射煙草葉片三天后進(jìn)行Ｃｏｎｆｏｃａ丨熒光顯微鏡觀察，第一張圖片為ＧＦＰ的熒光??信號(hào)，第二張圖片為細(xì)胞核染料ＤＡＰＩ的熒光信號(hào)，第三張圖片為兩者以及ＤＩＣ光學(xué)圖像的疊加。??２．３器官特異性表達(dá)??為了獲知ＧｍＭＪＴ與其互作蛋白基因Ｇｗ幼Ｖ２的器官特異性表達(dá)的異同，利用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ??ＲＴ－ＰＣＲ的方法進(jìn)行檢測(cè)。用ＧｗＴＷＦ基因特異性引物ＮＩＷ－ｑＰＣＲ－Ｆ和ＮＩＷ－ｑＰＣＲ－Ｒ?（序列見??附錄）對(duì)ＧｍＭＦ基因在大豆不同器官中的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，用基因特異性引物??ＳＩＮ２－ｑＰＣＲ－Ｆ和ＳＩＮ２－ｑＰＣＲ－Ｒ?（序列見附錄）對(duì)ＧｗＳ／Ａ＾基因在大豆不同器官中的表達(dá)情況進(jìn)??行檢測(cè)，結(jié)果表明ＧｍＭＦ在大豆葉片中的表達(dá)量最高，在莖，花，種子中的表達(dá)量次之，在??根中表達(dá)量極低（圖３．６?Ａ）。ＧｗＳ／＾２在根，葉，花中的表達(dá)量高，在莖中表達(dá)量低，在種子??中表達(dá)量極低（圖３．６?Ｂ）。這些結(jié)果說明和具有不同的器官特異性表達(dá)模??式，但在莖、葉、花中，兩者均有較高的表達(dá)，它們可能在這些器官中共同作用。??Ａ?１．２「?Ｂ?１．６「??ｃ?■?ＧｍＮＩＷ?ｃ?Ｉ?ＧｍＳＩＮ２??丨：：Ｌｄｉｉ?；：ｌｌ?ｉｌｌ．??Ｒｏｏｔ?Ｓｔｅｍ?Ｌｅａｆ?Ｆｌｏｗｅｒ?Ｓｅｅｄ?Ｒｏｏｔ?Ｓｔｅｍ?Ｌｅａｆ?Ｆｌｏｗｅｒ?Ｓｅｅｄ??圖３．?６?和的器官特異性表達(dá)??

５０?ｍＭ?ＮａＣｌ處理０?ｈ，?２?ｈ，６?ｈ，?１２?ｈ后提取葉片總ＲＮＡ，??反轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ，用ＧｗｊＷＰＦ基因特異性引物ＮＩＷ－ｑＰＣＲ－Ｆ和ＮＩＷ－ｑＰＣＲ－Ｒ?（序列見附錄）檢??測(cè)ＧｍＭＦ在１５０?ｍＭ?ＮａＣｌ脅迫處理下的基因脅迫響應(yīng)模式，用基因特異性引物ＳＩＮ２－??ｑＰＣＲ－Ｆ和ＳＩＮ２－ｑＰＣＲ－Ｒ?（序列見附錄）檢測(cè)在１５０ｍＭＮａＣｌ脅迫處理下的基因脅迫??響應(yīng)模式。結(jié)果表明ＧｍＭｆＦ在６ｈ受ＮａＣｌ誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)２－３倍，而在２ｈ和１２ｈ表達(dá)變化不??明顯（圖３．７?Ａ）；?自２?ｈ即受ＮａＣｌ強(qiáng)烈誘導(dǎo)，表達(dá)量上調(diào)近２０倍，隨著時(shí)間推移，??在處理６ｈ和１２ｈ時(shí)上調(diào)幅度逐漸降低至１０倍和４倍（圖３．７Ｂ）。這說明ＧｍＡＷＦ和??均為鹽脅迫短期響應(yīng)基因，但受ＮａＣｌ誘導(dǎo)表達(dá)程度更高且響應(yīng)更早。??Ａ?Ｂ??４?ＧｍＮＩＷ?２５?ＧｍＳＩＮ２??ｉ?？?｜?２０?■?１??Ｈ?Ｔ??Ｉ?＿??＿??Ｏｈ?２ｈ?６ｈ?１２ｈ?Ｏｈ?２ｈ?６ｈ?１２ｈ??圖３．７?ＧｗＭＪＦ和在鹽脅迫下的表達(dá)模式??Ｆｉｇｕｒｅ?３．７?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐａｔｔｅｒｎｓ?ｏｆ?ＧｍＮＩＷ?ａｎｄ?ＧｍＳＩＮ２?ｕｎｄｅｒ?ｓａｌｔ?ｓｔｒｅｓｓ??Ａ－Ｂ：將ｌ／２Ｈｏａｇｌａｎｄ液體培養(yǎng)的Ｖ２期大豆Ｗｉｌｌｉａｍｓ８２分別用ｌ５０ｍＭＮａＣ丨處理Ｏｈ，?２ｈ，?６ｈ，?］２ｈ后提取葉??片總ＲＮＡ，反轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ作為模板，用ＧｗＡ７妒基因特異性引物ＮＩＷ－ｑｐｃｒ－Ｆ／ＮＩＷ－ｑｐｃｒ－Ｒ引物（Ａ）和Ｇ？ｊＳ／／Ｖ２??３６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物NAC轉(zhuǎn)錄因子家族研究概況[J]. 彭輝,于興旺,成慧穎,張樺,石慶華,李建貴,麻浩.  植物學(xué)報(bào). 2010(02)



本文編號(hào)：3027775