稻瘟病是對(duì)水稻生產(chǎn)最具威脅的真菌病害之一。本研究首先對(duì)遼寧地區(qū)水稻資源所攜帶的抗稻瘟病基因進(jìn)行了鑒定,分析了不同抗稻瘟病基因在田間的抗病效應(yīng);其次,以實(shí)驗(yàn)室前期結(jié)果為基礎(chǔ),篩選高抗品種港育129中抗稻瘟病新基因Pi65（t）的候選基因,構(gòu)建了 3個(gè)候選基因的CRISPR敲除載體,并轉(zhuǎn)化到港育129中,驗(yàn)證基因的功能。本研究對(duì)于遼寧省地區(qū)抗稻瘟病水稻新品種的選育具重要意義。1.為了明確遼寧地區(qū)水稻資源中抗稻瘟病基因的分布情況及抗病效應(yīng),選取遼寧地區(qū)水稻資源176份,鑒定了抗稻瘟病基因pi21、Pi36、Pi37、Pita、Pid2、Pid3、Pi5及Pib在這些材料中的分布情況,并接種鑒定了這些材料對(duì)稻瘟病的抗性。結(jié)果表明:176份供試材料中,83份對(duì)稻瘟病表現(xiàn)抗病,栽培稻、雜草稻及農(nóng)家種中抗病品種所占的比率分別為41.48%、1.14%及4.54%�？沟疚敛』騪i21、Pi36和Pi37在所有參試材料中均未檢測(cè)到,且分別有74份、49份、47份、52份及89份材料攜帶Pita、Pid2、Pid3、Pi5及Pib的抗病等位基因。抗病基因絕大部分分布在栽培種中,農(nóng)家種和雜草稻中分布較少。... 

【文章來(lái)源】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 稻瘟病發(fā)生概況
        1.1.1 稻瘟病發(fā)生概況及危害
        1.1.2 稻瘟病菌的侵染過(guò)程
        1.1.3 稻瘟病菌的侵染循環(huán)
    1.2 抗稻瘟病基因的研究進(jìn)展
        1.2.1 抗稻瘟病基因的定位
        1.2.2 抗稻瘟病基因的克隆
        1.2.3 在育種上抗稻瘟病基因的應(yīng)用
    1.3 CRISPR/Cas基因編輯技術(shù)
        1.3.1 CRISPR/Cas基因編輯技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.3.2 CRISPR/Cas基因編輯技術(shù)的進(jìn)展
        1.3.3 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的構(gòu)成
        1.3.4 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的作用機(jī)理
        1.3.5 CRISPR/Cas9系統(tǒng)在植物基因編輯中的應(yīng)用
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 遼寧地區(qū)水稻資源抗稻瘟病基因的檢測(cè)分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 抗稻瘟病表型鑒定方法
        2.1.3 抗稻瘟病基因型鑒定方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 176份水稻資源的抗稻瘟病表型鑒定
        2.2.2 8個(gè)抗稻瘟病基因在不同類型水稻資源中的分布及其抗病效應(yīng)分析
    2.3 討論
        2.3.1 抗稻瘟病基因在水稻材料中的分布情況及其對(duì)抗病性的貢獻(xiàn)
        2.3.2 不同抗稻瘟病基因的抗病效應(yīng)
    2.4 結(jié)論
第三章 抗稻瘟病基因Pi65（t）候選基因的篩選
    3.1 材料和方法
        3.1.1 水稻材料
        3.1.2 基因組DNA的提取
        3.1.3 引物的設(shè)計(jì)
        3.1.4 PCR擴(kuò)增
        3.1.5 電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.6 PCR產(chǎn)物序列比對(duì)
        3.1.7 候選基因的誘導(dǎo)表達(dá)鑒定
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 候選基因Os11g0694500的擴(kuò)增結(jié)果及序列分析
        3.2.2 候選基因Os11g0694600的擴(kuò)增結(jié)果及序列分析
        3.2.3 候選基因Os11g0694850的序列擴(kuò)增結(jié)果及序列分析
        3.2.4 候選基因Os11g0695000的序列擴(kuò)增結(jié)果
        3.2.5 候選基因的誘導(dǎo)表達(dá)分析
    3.3 討論
        3.3.1 Os11g0694500
        3.3.2 Os11g0694600
        3.3.3 Os11g0694850
        3.3.4 Os11g0695000
    3.4 結(jié)論
第四章 Pi65（t）候選基因的敲除載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化
    4.1 材料與方法
        4.1.1 水稻材料、供試菌株和載體
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 培養(yǎng)基配制
        4.1.4 CRISPR/Cas9敲除載體的構(gòu)建
        4.1.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)水稻表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.1.6 CRISPR/Cas9敲除載體轉(zhuǎn)入港育129
    4.2 結(jié)果分析
        4.2.1 3個(gè)候選基因敲除載體的構(gòu)建
        4.2.2 農(nóng)桿菌的陽(yáng)性克隆鑒定
        4.2.3 敲除載體的遺傳轉(zhuǎn)化
        4.2.4 Os11g0694850敲除轉(zhuǎn)化子的基因型鑒定
    4.3 討論
    4.4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位論文期間發(fā)表文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3024225