金黃色葡萄球菌能誘發(fā)奶牛乳房炎,是臨床上最難治療且造成經(jīng)濟損失最大的病原菌,嚴重阻礙了奶牛產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。在奶牛乳腺發(fā)生金黃色葡萄球菌感染時,其表面的固有成分脂磷壁酸（Staphylococcus aureus lipoteichoic acid,LTA-sa）能夠作為配體被識別,引起奶牛乳腺組織發(fā)生炎癥反應,改變?nèi)橹腥榈鞍缀腿橹镜热槌煞值暮�。但具體機制尚不十分明確。本試驗以體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）為泌乳模型,研究LTA-sa對BMECs中乳蛋白合成功能及相關(guān)信號通路的影響,為進一步研究牛奶蛋白合成的調(diào)控機制,提高牛奶的營養(yǎng)質(zhì)量提供科學依據(jù)。為明確LTA-sa構(gòu)建炎癥細胞模型的最佳處理濃度以及核因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）抑制劑PDTC和信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄活化因子3（Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）抑制劑stattic的最佳處理濃度,分別用不同濃度的LTA-sa、PDTC和stattic處理BM... 

【文章來源】： 耿子健 黑龍江八一農(nóng)墾大學

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

奶牛乳腺上皮細胞的原代培養(yǎng)(40×)

LTA-sa對奶牛乳腺上皮細胞中乳蛋白合成及相關(guān)信號通路的影響24二次純化后，視野中上皮細胞已占據(jù)主導位置，但仍有部分成纖維細胞混雜在其中(圖3-2B)；第三次純化后，視野中已觀察不到成纖維細胞的存在，表明我們已經(jīng)獲得了相對純凈的上皮細胞，且細胞生長狀態(tài)良好。三次純化后，我們在每次細胞傳代時依舊進行純化過程，以保持細胞的純凈。通過免疫熒光技術(shù)，使用CK-18抗體對所獲得的上皮細胞進行鑒定，如圖3-3所示，藍色熒光為被DAPI染色的細胞核(圖3-3A)，CK-18激發(fā)的綠色熒光明亮清晰，表明CK-18蛋白在細胞質(zhì)和細胞膜上大量表達(圖3-3B)。該結(jié)果表明我們從荷斯坦奶牛乳腺組織所分離獲得的細胞為BMECs，且純度較高。圖3-2奶牛乳腺上皮細胞的分離純化(100×)Fig3-2Isolationandpurificationofbovinemammaryepithelialcells(100×)(A)：第一次純化的結(jié)果；(B)：第二次純化的結(jié)果；(C)：第三次純化的結(jié)果。(A):Theresultsoffirstpurification;(B):Theresultsofsecondpurification;(C):Theresultsofthirdpurification.圖3-3奶牛乳腺上皮細胞CK-18的免疫熒光結(jié)果(200×)Fig.3-3ImmunofluorescenceresultsofCK-18inBMECs(200×)A：DAPI染色結(jié)果；B：CK-18的免疫熒光結(jié)果；C：A、B合圖。A:theresultsofDAPIstaining;B:ImmunofluorescenceresultsofCK-18;C:ResultofmergedAandB.3.1.3BMECs中CSN2表達能力的檢測通過WesternBlot技術(shù)檢測純化至第5代、第6代、第7代的BMECs中CSN2的蛋白表達情況。結(jié)果如圖3-4所示，CSN2能夠正常表達，且各代細胞之間CSN2的蛋白相對

LTA-sa對奶牛乳腺上皮細胞中乳蛋白合成及相關(guān)信號通路的影響24二次純化后，視野中上皮細胞已占據(jù)主導位置，但仍有部分成纖維細胞混雜在其中(圖3-2B)；第三次純化后，視野中已觀察不到成纖維細胞的存在，表明我們已經(jīng)獲得了相對純凈的上皮細胞，且細胞生長狀態(tài)良好。三次純化后，我們在每次細胞傳代時依舊進行純化過程，以保持細胞的純凈。通過免疫熒光技術(shù)，使用CK-18抗體對所獲得的上皮細胞進行鑒定，如圖3-3所示，藍色熒光為被DAPI染色的細胞核(圖3-3A)，CK-18激發(fā)的綠色熒光明亮清晰，表明CK-18蛋白在細胞質(zhì)和細胞膜上大量表達(圖3-3B)。該結(jié)果表明我們從荷斯坦奶牛乳腺組織所分離獲得的細胞為BMECs，且純度較高。圖3-2奶牛乳腺上皮細胞的分離純化(100×)Fig3-2Isolationandpurificationofbovinemammaryepithelialcells(100×)(A)：第一次純化的結(jié)果；(B)：第二次純化的結(jié)果；(C)：第三次純化的結(jié)果。(A):Theresultsoffirstpurification;(B):Theresultsofsecondpurification;(C):Theresultsofthirdpurification.圖3-3奶牛乳腺上皮細胞CK-18的免疫熒光結(jié)果(200×)Fig.3-3ImmunofluorescenceresultsofCK-18inBMECs(200×)A：DAPI染色結(jié)果；B：CK-18的免疫熒光結(jié)果；C：A、B合圖。A:theresultsofDAPIstaining;B:ImmunofluorescenceresultsofCK-18;C:ResultofmergedAandB.3.1.3BMECs中CSN2表達能力的檢測通過WesternBlot技術(shù)檢測純化至第5代、第6代、第7代的BMECs中CSN2的蛋白表達情況。結(jié)果如圖3-4所示，CSN2能夠正常表達，且各代細胞之間CSN2的蛋白相對

【參考文獻】：
期刊論文
[1]脂磷壁酸體外誘導奶牛乳腺上皮細胞炎癥模型的建立與評價[J]. 孫靜,冶冬陽,王旭榮,侯艷華,張凱,張景艷,王磊,張康,李建喜,楊志強.  中國獸醫(yī)科學. 2018(08)

碩士論文
[1]PRL抵抗在LPS導致BMEC乳蛋白合成功能降低中的作用[D]. 單旭菲.黑龍江八一農(nóng)墾大學 2019
[2]奶牛乳腺上皮細胞JAK2-STAT5和mTOR信號通路協(xié)同調(diào)控乳蛋白合成[D]. 史琳琳.東北農(nóng)業(yè)大學 2013



本文編號：2996543