小黑麥茉莉酸誘導蛋白基因的克隆與功能分析
發(fā)布時間：2021-01-24 03:47
目的:干旱是影響作物品質和產(chǎn)量的主要非生物脅迫因素之一。植物在遭受到外界脅迫時會啟動特異基因的表達,從而大量合成茉莉酸誘導蛋白。茉莉酸誘導蛋白在植物生長發(fā)育及生物和非生物脅迫抵御反應中具有重要作用。本研究擬從六倍體小黑麥中克隆茉莉酸誘導蛋白基因,并對其功能進行解析,以期為小黑麥抗旱育種提供候選基因,也為理解小黑麥應激干旱脅迫提供理論基礎。方法:以干旱脅迫下小黑麥轉錄組測序數(shù)據(jù)為基礎,利用RT-PCR技術從小黑麥中克隆在干旱脅迫下顯著上調表達的茉莉酸誘導蛋白基因TwRIP1的編碼區(qū)全長,并對其生物信息學進行分析;利用qRT-PCR技術檢測了干旱脅迫下TwRIP1基因在小黑麥不同組織中的表達量,分析了TwRIP1基因在20%PEG 6000、200 mM NaCl和4℃低溫脅迫下的表達模式,并通過100μM MeJA和100μM ABA浸根及葉片噴灑的方法探討其受這兩種激素誘導后的基因表達量變化;經(jīng)BSMV病毒介導VIGS技術沉默小黑麥中的TwRIP1基因后,測定干旱脅迫和100μM MeJA處理下該基因表達量及抗旱生理指標變化,以探索該基因的功能;同時構建了含有該目的基因的過表達載體,采...
【文章來源】： 凌悅銘 石河子大學
【文章頁數(shù)】：83 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
當植物受到脅迫時JIP60的作用機制（DeZaeytijdandVanDamme,2017）
小黑麥茉莉酸誘導蛋白基因的克隆與功能分析13細胞定位。2.3結果分析2.3.1小黑麥葉片基因組DNA和總RNA質量2.3.1.1基因組DNA質量檢測所提取的正常生長條件下的小黑麥葉片總DNA，經(jīng)1.0％瓊脂糖凝膠電泳檢測（圖2-1），其降解較少，完整性較好，其A260/A280均在1.8～2.0之間，可見所提取的DNA質量較好。圖2-1DNA電泳圖Fig.2-1DNAprofile注：泳道1、2表示兩個重復Lanes1,2indicatetworeplicates2.3.1.2總RNA質量及cDNA檢測所提取的正常生長條件下的小黑麥葉片總RNA，經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測（圖2-2），其28S和18S核糖體RNA條帶清晰，28SrRNA的亮度基本為18SrRNA的兩倍，完整性較好，其A260/A280均在2.0～2.2之間，可見所提取的RNA質量較好。采用反轉錄試劑盒將RNA反轉錄成cDNA，以小麥β-Actin基因為內(nèi)參進行PCR擴增，經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳結果顯示（圖2-3），內(nèi)參β-Actin基因目標條帶大小正確，條帶清晰，無雜帶。可見反轉錄的cDNA可以用于后期實驗。28SrRNA18SrRNA12圖2-2RNA電泳檢測圖Fig.2-2RNAprofile注：泳道1，2：2次重復。Note:lanes1,2:2repetitions.12
小麥內(nèi)參β-Actin基因PCR擴增結果
【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于全血基因表達譜的腦組織基因表達量預測模型的建立[J]. 徐文劍,李巍. 首都醫(yī)科大學學報. 2019(05)
[2]氮肥緩解苗期干旱對小麥根系形態(tài)建成及生理特性的影響[J]. 何夢迪,鐘宣伯,周啟政,崔楠,汪桂鳳,馬武軍,唐桂香. 核農(nóng)學報. 2019(11)
[3]干旱脅迫對不同抗旱性苜蓿品種根系形態(tài)及解剖結構的影響[J]. 張翠梅,師尚禮,劉珍,楊帆,張振科. 草業(yè)學報. 2019(05)
[4]咪唑類氮氧自由基化合物的生物活性研究進展[J]. 邵瑾,楊穎,馬慧萍,賈正平,景臨林. 國際藥學研究雜志. 2019(03)
[5]植物干旱脅迫響應機制研究進展[J]. 王凱悅,陳芳泉,黃五星. 中國農(nóng)業(yè)科技導報. 2019(02)
[6]氣候變暖背景下中國干旱強度、頻次和持續(xù)時間及其南北差異性[J]. 韓蘭英,張強,賈建英,王有恒,黃濤. 中國沙漠. 2019(05)
[7]脯氨酸轉運相關基因的研究進展[J]. 陳穎,王婷,華學軍. 植物學報. 2018(06)
[8]巴哈雀稗PnDREB2基因克隆及時序表達圖譜構建[J]. 張宇君,王普昶,趙麗麗,曾慶飛,張雄,陳超,董瑞. 核農(nóng)學報. 2019(01)
[9]紅肉蜜柚PDR型轉運蛋白基因的發(fā)掘及CmPDR11-2表達與耐草甘膦初步分析[J]. 宋敏娜,姚婷婷,潘騰飛,蒲小龍,張迪,謝冬梅,潘東明. 熱帶作物學報. 2018(09)
[10]不同生育時期冬小麥葉片相對含水量高光譜監(jiān)測[J]. 劉曉靜,陳國慶,王良,陳玉潔,王蘭,劉肖瑜,李學國. 麥類作物學報. 2018(07)
本文編號：2996509
【文章來源】： 凌悅銘 石河子大學
【文章頁數(shù)】：83 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
當植物受到脅迫時JIP60的作用機制（DeZaeytijdandVanDamme,2017）
小黑麥茉莉酸誘導蛋白基因的克隆與功能分析13細胞定位。2.3結果分析2.3.1小黑麥葉片基因組DNA和總RNA質量2.3.1.1基因組DNA質量檢測所提取的正常生長條件下的小黑麥葉片總DNA，經(jīng)1.0％瓊脂糖凝膠電泳檢測（圖2-1），其降解較少，完整性較好，其A260/A280均在1.8～2.0之間，可見所提取的DNA質量較好。圖2-1DNA電泳圖Fig.2-1DNAprofile注：泳道1、2表示兩個重復Lanes1,2indicatetworeplicates2.3.1.2總RNA質量及cDNA檢測所提取的正常生長條件下的小黑麥葉片總RNA，經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測（圖2-2），其28S和18S核糖體RNA條帶清晰，28SrRNA的亮度基本為18SrRNA的兩倍，完整性較好，其A260/A280均在2.0～2.2之間，可見所提取的RNA質量較好。采用反轉錄試劑盒將RNA反轉錄成cDNA，以小麥β-Actin基因為內(nèi)參進行PCR擴增，經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳結果顯示（圖2-3），內(nèi)參β-Actin基因目標條帶大小正確，條帶清晰，無雜帶。可見反轉錄的cDNA可以用于后期實驗。28SrRNA18SrRNA12圖2-2RNA電泳檢測圖Fig.2-2RNAprofile注：泳道1，2：2次重復。Note:lanes1,2:2repetitions.12
小麥內(nèi)參β-Actin基因PCR擴增結果
【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于全血基因表達譜的腦組織基因表達量預測模型的建立[J]. 徐文劍,李巍. 首都醫(yī)科大學學報. 2019(05)
[2]氮肥緩解苗期干旱對小麥根系形態(tài)建成及生理特性的影響[J]. 何夢迪,鐘宣伯,周啟政,崔楠,汪桂鳳,馬武軍,唐桂香. 核農(nóng)學報. 2019(11)
[3]干旱脅迫對不同抗旱性苜蓿品種根系形態(tài)及解剖結構的影響[J]. 張翠梅,師尚禮,劉珍,楊帆,張振科. 草業(yè)學報. 2019(05)
[4]咪唑類氮氧自由基化合物的生物活性研究進展[J]. 邵瑾,楊穎,馬慧萍,賈正平,景臨林. 國際藥學研究雜志. 2019(03)
[5]植物干旱脅迫響應機制研究進展[J]. 王凱悅,陳芳泉,黃五星. 中國農(nóng)業(yè)科技導報. 2019(02)
[6]氣候變暖背景下中國干旱強度、頻次和持續(xù)時間及其南北差異性[J]. 韓蘭英,張強,賈建英,王有恒,黃濤. 中國沙漠. 2019(05)
[7]脯氨酸轉運相關基因的研究進展[J]. 陳穎,王婷,華學軍. 植物學報. 2018(06)
[8]巴哈雀稗PnDREB2基因克隆及時序表達圖譜構建[J]. 張宇君,王普昶,趙麗麗,曾慶飛,張雄,陳超,董瑞. 核農(nóng)學報. 2019(01)
[9]紅肉蜜柚PDR型轉運蛋白基因的發(fā)掘及CmPDR11-2表達與耐草甘膦初步分析[J]. 宋敏娜,姚婷婷,潘騰飛,蒲小龍,張迪,謝冬梅,潘東明. 熱帶作物學報. 2018(09)
[10]不同生育時期冬小麥葉片相對含水量高光譜監(jiān)測[J]. 劉曉靜,陳國慶,王良,陳玉潔,王蘭,劉肖瑜,李學國. 麥類作物學報. 2018(07)
本文編號：2996509
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