黃瓜（Cucumis sativus）是我國設(shè)施蔬菜栽培面積最大的作物之一。由單絲白粉病菌（Sphaerotheca fuliginea）引起的白粉病是黃瓜生產(chǎn)中的一種重要病害,嚴(yán)重影響黃瓜的產(chǎn)量與質(zhì)量。研究表明,黃瓜中有兩個(gè)NBS-LRR型蛋白（Cucsa.102240、Cucsa123410）被預(yù)測(cè)與擬南芥抗白粉病蛋白R(shí)PW8具有類似的結(jié)構(gòu)域序列,我們將這兩個(gè)蛋白分別命名為CsRSF1和CsRSF2蛋白。核苷酸結(jié)合富亮氨酸重復(fù)序列（NBS-LRR）型蛋白可以直接或間接識(shí)別不同來源的病原物效應(yīng)子,在植物防御機(jī)制中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。但目前CsRSF1和CsRSF2基因在黃瓜調(diào)控白粉病過程中有何作用仍不清楚。本研究克隆獲得CsRSF1和CsRSF2基因的CDS區(qū)序列,明確了CsRSF1和CsRSF2基因的序列特征與表達(dá)模式,并利用基因瞬時(shí)沉默和過量表達(dá)技術(shù),初步揭示了CsRSF1和CsRSF2基因在黃瓜響應(yīng)白粉病菌侵染中的作用。主要研究結(jié)果如下:（1）在黃瓜抗、感白粉病姐妹系B21-a-2-1-2和B21-a-2-2-2中分別克隆獲得CsRSF1和CsREF2基因的CDS區(qū)序列,CsRS... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 植物NBS-LRR蛋白
        1.1.1 植物NBS-LRR蛋白的起源與分類
        1.1.2 植物NBS-LRR蛋白的結(jié)構(gòu)域及其功能
        1.1.3 植物NBS-LRR蛋白誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)的分子機(jī)制
        1.1.4 植物NBS-LRR蛋白的應(yīng)用
    1.2 本研究目的與意義
    1.3 技術(shù)路線
第二章 黃瓜CsRSF1和CsRSF2基因的克隆、定位及表達(dá)分析
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體和菌株
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 引物合成及測(cè)序
        2.1.5 數(shù)據(jù)處理
    2.2 方法
        2.2.1 RNA提取及c DNA合成
        2.2.2 CsRSF1和CsRSF2基因CDS區(qū)的克隆
        2.2.3 亞細(xì)胞定位載體構(gòu)建
        2.2.4 煙草葉片瞬時(shí)過表達(dá)
        2.2.5 實(shí)時(shí)定量PCR（q RT-PCR）
        2.2.6 煙草表皮細(xì)胞的觀察
        2.2.7 CsRSF1和CsRSF2基因的生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 CsRSF1和CsRSF2基因擴(kuò)增
        2.3.2 CsRSF1和CsRSF2基因的生物信息學(xué)分析
        2.3.3 CsRSF1和CsRSF2蛋白亞細(xì)胞定位分析
        2.3.4 CsRSF1和CsRSF2基因表達(dá)分析
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
第三章 Cs RSF1和Cs RSF2基因在黃瓜響應(yīng)白粉病菌侵染中的作用
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 載體和菌株
        3.1.3 試劑配制
        3.1.4 引物合成及測(cè)序
        3.1.5 數(shù)據(jù)處理
    3.2 方法
        3.2.1 黃瓜白粉病菌的培養(yǎng)與接種
        3.2.2 RNA的提取和c DNA合成
        3.2.3 CsRSF1和CsRSF2基因瞬時(shí)沉默表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.4 CsRSF1和CsRSF2基因瞬時(shí)過表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.5 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化黃瓜子葉
        3.2.6 黃瓜原生質(zhì)體的提取
        3.2.7 黃瓜原生質(zhì)體細(xì)胞的觀察
        3.2.8 黃瓜病情指數(shù)調(diào)查
        3.2.9 考馬斯亮藍(lán)染色
        3.2.10 qRT-PCR
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 白粉病菌脅迫下CsRSF1和CsRSF2基因的表達(dá)模式分析
        3.3.2 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬時(shí)沉默表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.3 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬時(shí)過表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.4 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)EHA105
        3.3.5 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬時(shí)沉默黃瓜子葉的鑒定
        3.3.6 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬時(shí)過表達(dá)黃瓜子葉的鑒定
        3.3.7 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬時(shí)沉默黃瓜子葉的白粉病抗性鑒定
        3.3.8 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬時(shí)過表達(dá)黃瓜子葉的白粉病抗性鑒定
        3.3.9 CsRSF1和CsRSF2 對(duì)防御相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：2992259