人參（Panax ginseng C.A.Mey）為五加科多年生草本植物,是名貴的中藥材。研究表明,人參在調(diào)節(jié)人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)、提高免疫力、抗疲勞、抗腫瘤、降血糖等方面都有良好功效,因此被廣泛用于藥品、保健品、化妝品等各類(lèi)產(chǎn)品中,具有可觀的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。人參主要通過(guò)種子繁殖,人參種子具有后熟特性,需要經(jīng)歷長(zhǎng)時(shí)間的形態(tài)后熟和生理后熟。目前人參種子后熟的分子機(jī)制尚不清晰。赤霉素和脫落酸是調(diào)控種子休眠和萌發(fā)的關(guān)鍵激素,在人參種子后熟過(guò)程中,種胚需要依次完成形態(tài)后熟和生理后熟才能發(fā)芽,WRKY轉(zhuǎn)錄因子能通過(guò)調(diào)控靶基因的表達(dá),調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育。本研究對(duì)人參種子進(jìn)行自然層積處理,篩選赤霉素和脫落酸代謝關(guān)鍵基因（GA2ox、GA20ox、NCED、CYP707A）、植物胚胎發(fā)育相關(guān)基因（SERK、BBM、WUS、FUS3、AGL15、LEC1）和WRKY轉(zhuǎn)錄因子（WRKY3、WRKY6、WRKY40）,利用半定量PCR和熒光定量PCR對(duì)以上基因在人參種子后熟過(guò)程中的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。本研究結(jié)果如下:（1）對(duì)新鮮采集的人參種子進(jìn)行層積處理,每45天取樣一次,根據(jù)種胚形態(tài)和胚率將人參種子后熟... 

【文章來(lái)源】： 曲慶玲 吉林大學(xué)

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

GA和ABA對(duì)種子休眠解除和后熟作用情況

吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文22圖2.1人參種子總RNA提取電泳圖S1：形態(tài)后熟早期；S2：形態(tài)后熟中期；S3：形態(tài)后熟末期；S4：生理后熟早期；S5：生理后熟中期；S6：生理后熟末期從圖2.1中可以看出，每個(gè)時(shí)期的RNA電泳都顯示三條條帶，分別為5SrRNNA，18SrRNA和28SrRNA。18SrRNA和28SrRNA條帶清晰，且條帶量度比為1:2，說(shuō)明提取的RNA質(zhì)量較好，未發(fā)生降解，可進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。2.4.2基因克壟純化與序列分析2.4.2.15SrRNA基因的克隆及測(cè)序以人參種子cDNA為模板，克隆人參5SrRNA基因的核心片段，并純化測(cè)序，得到基因序列，基因克隆和純化結(jié)果見(jiàn)圖2.2，基因序列對(duì)比見(jiàn)圖2.3。圖2.25SrRNA基因電泳檢測(cè)結(jié)果M：DNAMarkerDL500；1-2：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；3：5SrRNA基因如圖2.2所示，人參5SrRNA基因PCR擴(kuò)增電泳檢測(cè)圖和純化電泳檢測(cè)圖S1S2S3S4S5S628S18S5S100bp150bp115bp100bp150bp115bpM12M3

第4章人參PgGA2ox、PgGA20ox和PgWRKY3基因全長(zhǎng)克隆23條帶清晰，沒(méi)有其他雜帶，純化效果好。圖2.3克隆的內(nèi)參基因與人參5SrRNA基因序列對(duì)比構(gòu)建克隆載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，轉(zhuǎn)化后得到單菌落，菌落PCR后獲得陽(yáng)性菌，測(cè)序之后得到5SrRNA基因序列，測(cè)序結(jié)果顯示基因片段為115bp，與已知人參5SrRNA基因（KM067390.1）進(jìn)行核酸序列比對(duì)，相似度分別為100%（如圖2.3），可以認(rèn)定克隆的基因片段為人參5SrRNA基因核心片段。2.4.2.2GA與種子后熟相關(guān)基因的克壟純化及測(cè)序(1)GA2ox基因以人參種子cDNA為模板，克隆人參GA2ox基因的核心片段，并純化，測(cè)序，得到基因序列，基因克隆和純化電泳檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2.4，基因序列對(duì)比見(jiàn)圖2.5。圖2.4GA2ox基因克隆和純化電泳檢測(cè)結(jié)果M：DNAMarkerDL500；1-2：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；3：GA2ox基因M3167bp200bp100bpM12167bp150bp200bp

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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