鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是蘭科石斛屬多年生附生草本植物,是一種兼具觀賞價值與藥用價值的中草藥。本文選用鐵皮石斛原球莖為材料（產(chǎn)地為福建連城）,對原球莖離體培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,并以此為基礎(chǔ)測定不同濃度和處理時間尖孢鐮刀菌誘導(dǎo)子處理下鐵皮石斛原球莖總生物堿含量的變化。同時克隆了兩個調(diào)控生物堿合成途徑相關(guān)酶的基因——DoHDR基因和DoIspF基因,并進(jìn)行了基因相對表達(dá)量分析。1鐵皮石斛離體培養(yǎng)條件優(yōu)化以連城鐵皮石斛為材料,優(yōu)化鐵皮石斛離體培養(yǎng)條件。①對比水楊酸、蛋白胨和番茄汁對鐵皮石斛原球莖增殖的影響,結(jié)果顯示,當(dāng)水楊酸濃度為2 mg/L時原球莖增殖效果最好,但原球莖生長狀態(tài)不好。蛋白胨濃度為2 mg/L時最有利原球莖增殖,番茄汁添加量為100 ml/L時原球莖增殖效果最好,且原球莖生長旺盛。②比較幾組不同混合有機(jī)添加物對鐵皮石斛原球莖增殖的影響,采用的添加物組合分別為香蕉和土豆、蘋果和土豆、香蕉和蘋果、番茄和土豆。結(jié)果表明添加50g/L土豆增殖效果最好③比較不同容器和培養(yǎng)方式對原球莖增殖的影響,結(jié)果表明,采用三角瓶液體振蕩培養(yǎng)最有... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮寫詞
摘要
    1 鐵皮石斛離體培養(yǎng)條件優(yōu)化
    2 真菌誘導(dǎo)子對鐵皮石斛總生物堿含量的影響
    3 鐵皮石斛HDR基因和ISPF基因的克隆和生物信息學(xué)分析
    4 真菌誘導(dǎo)子處理下生物戚合成相關(guān)基因DoHDR與DoIspF基因相對表達(dá)量分析
ABSTRACT
第一章 引言
    1 石斛屬植物離體培養(yǎng)研究進(jìn)展
        1.1 有機(jī)添加物對藥用石斛屬植物離體培養(yǎng)的影響
        1.2 植物激素對藥用石斛屬植物離體培養(yǎng)的影響
        1.3 環(huán)境條件對藥用石斛屬植物離體培養(yǎng)的影響
        1.4 其他因素對藥用石斛屬植物離體培養(yǎng)的影響
    2 石斛屬生物堿的研究進(jìn)展
        2.1 藥理作用
        2.2 影響生物堿含量的因素
    3 誘導(dǎo)子研究進(jìn)展
        3.1 非生物誘導(dǎo)子
        3.2 真菌誘導(dǎo)子
    4 植物倍半萜合成途徑以及相關(guān)酶基因
        4.1 HDR基因研究進(jìn)展
        4.2 IspF基因研究進(jìn)展
    5 本研究的意義與主要內(nèi)容
        5.1 研究意義
        5.2 研究內(nèi)容
第二章 鐵皮石斛原球莖離體培養(yǎng)條件的優(yōu)化
    第一節(jié) 不同添加物對鐵皮石斛原球莖增殖的影響
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 不同濃度水楊酸對鐵皮石斛原球莖增殖的影響
            2.2 不同濃度蛋白胨對鐵皮石斛原球莖增殖的影響
            2.3 不同濃度番茄汁對鐵皮石斛原球莖增殖的影響
        3. 討論
            3.1 水楊酸能夠促進(jìn)鐵皮石斛原球莖的增殖
            3.2 適當(dāng)濃度的蛋白胨能夠促進(jìn)鐵皮石斛原球莖增殖
            3.3 適當(dāng)濃度的番茄汁能夠促進(jìn)鐵皮石斛原球莖增殖
    第二節(jié) 混合天然有機(jī)添加物對鐵皮石斛原球莖增殖的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試驗方法
            1.3 基本培養(yǎng)條件
        2 結(jié)果與分析
            2.1 香蕉與土豆混合物對鐵皮石斛原球莖增殖情況的影響
            2.2 蘋果與土豆混合物對鐵皮石斛原球莖增殖情況的影響
            2.3 香蕉與蘋果混合物對鐵皮石斛原球莖增殖情況的影響
            2.4 番茄與土豆混合物對鐵皮石斛原球莖增殖情況的影響
        3 討論
            3.1 天然有機(jī)添加物都能一定程度上促進(jìn)鐵皮石斛原球莖的增殖
            3.2 土豆泥對鐵皮石斛原球莖增殖的促進(jìn)效果最佳
    第三節(jié) 不同培養(yǎng)方式及不同容器對鐵皮石斛原球莖增殖的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試驗方法
            1.3 培養(yǎng)條件
        2 結(jié)果與分析
        3 討論
第三章 真菌誘導(dǎo)子對鐵皮石斛總生物堿含量的影響
    第一節(jié) 不同濃度尖孢鐮刀菌誘導(dǎo)子以及不同處理天數(shù)對鐵皮石斛原球莖總生物堿含量的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 真菌誘導(dǎo)子制備方法
            1.3 樣品處理方法
            1.4 總生物堿的測定方法
            1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 添加100 mg/L真菌誘導(dǎo)子的情況下鐵皮石斛原球莖總生物堿含量的變化
            2.2 添加200 mg/L真菌誘導(dǎo)子的情況下鐵皮石斛原球莖總生物堿含量的變化
            2.3 添加500 mg/L真菌誘導(dǎo)子的情況下鐵皮石斛原球莖總生物堿含量的變化
            2.4 添加1000 mg/L真菌誘導(dǎo)子的情況下鐵皮石斛原球莖總生物堿含量的變化
        3 討論
            3.1 適當(dāng)濃度的尖孢鐮刀菌真菌誘導(dǎo)子促進(jìn)鐵皮石斛原球莖生物堿的合成與積累
            3.2 尖孢鐮刀菌誘導(dǎo)子處理合適的時間能夠促進(jìn)鐵皮石斛原球莖合成與積累生物堿
第四章 鐵皮石斛生物堿相關(guān)基因的克隆和生物信息學(xué)分析
    第一節(jié) 鐵皮石斛DoHDR基因的克隆和生物信息學(xué)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 DoHDR基因保守區(qū)克隆
            2.2 DoHDR基因3’端克隆
            2.3 DoHDR基因5’端克隆
            2.4 DoHDR基因拼接驗證
        3 生物信息學(xué)分析
            3.1 DoHDR基因所編碼的蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析
            3.2 蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.3 蛋白質(zhì)信號肽預(yù)測
            3.4 蛋白質(zhì)卷曲結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.5 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.6 蛋白質(zhì)磷酸化位點預(yù)測
            3.7 蛋白質(zhì)功能位點預(yù)測
            3.8 蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.9 亞細(xì)胞定位預(yù)測
            3.10 DoHDR蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建
        4 討論
            4.1 DoHDR基因與其他物種的相似性很大
            4.2 DoHDR基因克隆的意義
    第二節(jié) 鐵皮石斛DoIspF基因的克隆和生物信息學(xué)分析
        1. 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 DoIspF基因保守區(qū)的克隆
            2.2 DoIspF基因3’端的克隆
            2.3 DoIspF基因5’的克隆
            2.4 DolspF基因拼接驗證
        3 生物信息學(xué)分析
            3.1 DoIspF蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析
            3.2 蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.3 蛋白質(zhì)信號肽預(yù)測
            3.4 蛋白質(zhì)卷曲結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.5 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.6 蛋白質(zhì)磷酸化位點預(yù)測
            3.7 蛋白質(zhì)功能位點預(yù)測
            3.8 蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.9 亞細(xì)胞定位預(yù)測
            3.10 DoIspF蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建
        4 討論
            4.1 DoIspF基因與其他物種的相似性很大
            4.2 基因DoIspF克隆的意義
第五章 鐵皮石斛生物堿合成與積累相關(guān)基因定量表達(dá)分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 材料處理方法
        1.3 試劑與儀器
        1.4 總RNA提取及cDNA合成
        1.5 實時熒光定量PCR引物設(shè)計
        1.6 實時熒光定量PCR反應(yīng)體系
        1.7 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 18sRNA、DoHDR、DoIspF基因標(biāo)準(zhǔn)曲線分析
        2.2 鐵皮石斛DoHDR基因相對表達(dá)量分析
        2.3 鐵皮石斛DoIspF基因相對表達(dá)量分析
    3 討論
        3.1 DoHDR基因可能參與了鐵皮石斛生物堿含量調(diào)控
        3.2 DoIspF基因可能參與鐵皮石斛生物堿合成
第六章 小結(jié)
    1 鐵皮石斛離體培養(yǎng)條件優(yōu)化
    2 真菌誘導(dǎo)子對鐵皮石斛總生物堿含量的影響
    3 鐵皮石斛HDR基因和ISPF基因的克隆和生物信息學(xué)分析
    4 真菌誘導(dǎo)子處理下生物堿合成相關(guān)基因DOHDR與DOISPF基因相對表達(dá)量分析
參考文獻(xiàn)
附錄 圖版及圖版說明
附錄 DoHDR和DoIspF基祖（cDNA）序列登錄
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況、參加學(xué)術(shù)會議及獲獎情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]鐵皮石斛快繁體系和細(xì)胞培養(yǎng)研究[D]. 王麗瓊.華中科技大學(xué) 2013
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本文編號：2963610