本文關(guān)鍵詞：油菜染色體加倍及倍性鑒定方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究以甘藍(lán)型油菜純合品系(中雙11、F009)、甘藍(lán)型油菜雜交F1代(3828×0009、0009×3828)、甘藍(lán)型油菜和白菜型油菜雜交F1代(0470x3383、0009×3383)為誘導(dǎo)加倍材料,以秋水仙素為主要化學(xué)誘導(dǎo)加倍試劑,使用植物組織培養(yǎng)和化學(xué)試劑誘導(dǎo)相結(jié)合的方法誘導(dǎo)上述材料染色體加倍；通過(guò)傳統(tǒng)根尖細(xì)胞壓片觀察、形態(tài)學(xué)觀察和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)等方法,對(duì)加倍處理材料進(jìn)行倍性鑒定比較,并對(duì)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)油菜染色體倍性方法進(jìn)行深入研究。其主要結(jié)果如下：1.設(shè)置Omg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L五個(gè)濃度水平的秋水仙素梯度,在MS培養(yǎng)基上對(duì)受體材料種子進(jìn)行加倍處理,記錄并計(jì)算種子發(fā)芽率,存活率,加倍成功率,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)材料隨秋水仙素濃度的增高,種子發(fā)芽率和幼苗存活率逐漸降低,而加倍成功率逐漸上升；確定濃度60mg/L為油菜種子在培養(yǎng)基上的加倍最適濃度。2.本實(shí)驗(yàn)中采用純合甘藍(lán)型油菜、雜交甘藍(lán)型油菜、甘白種間雜交油菜三大類材料,通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),其中甘白種間雜交油菜對(duì)秋水仙素的耐受能力最強(qiáng),有最高的發(fā)芽率、存活率和加倍成功率,是最適用于加倍的材料。3.采用傳統(tǒng)根尖壓片計(jì)數(shù)染色體條數(shù)方法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)法檢測(cè)加倍處理材料染色體倍性,以根尖壓片計(jì)數(shù)染色體方法為參考,確定流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)油菜倍性的可靠性,并檢測(cè)出三倍體甘白雜交油菜F1代成功加倍得到的六倍體油菜和四倍體雜交甘藍(lán)型油菜F1代成功加倍得到的八倍體油菜。通過(guò)研究流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)油菜染色體方法,探索出了一套適用于油菜倍性檢測(cè)的技術(shù)體系：檢測(cè)所需最佳試劑配方：MOPS 20 mmol/L,檸檬酸鈉30mmol/L, MgCl2 45 mmol/L, TritonX-1000.2%(V/V),β-巰基乙醇20ul/ml;檢測(cè)樣本最佳用量0.1g; DNA特異性染色液使用體積最佳為400u1、濃度最佳為100ug/ml、染色時(shí)間最佳為30min。4.通過(guò)對(duì)加倍后代植株的形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn),加倍成功植株表現(xiàn)為莖稈變粗壯,植株矮化,葉片皺縮,花蕾變大,花瓣、柱頭和花藥也都變大,加倍成功油菜花期延后；不能正常結(jié)實(shí)的三倍體甘白雜交油菜經(jīng)加倍為六倍體能夠結(jié)實(shí),四倍體經(jīng)加倍為八倍體后結(jié)實(shí)率降低,但種子千粒重增加約70%。
【關(guān)鍵詞】：油菜 染色體加倍 倍性鑒定 流式細(xì)胞術(shù)
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S565.4
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 1 文獻(xiàn)綜述10-22
• 1.1 油菜多倍體育種的意義10-11
• 1.2 植物染色體加倍的方法11-14
• 1.2.1 自然多倍體的挖掘11
• 1.2.2 物理誘導(dǎo)加倍技術(shù)11-12
• 1.2.3 化學(xué)誘導(dǎo)加倍技術(shù)12-13
• 1.2.4 組織培養(yǎng)輔助染色體加倍技術(shù)13
• 1.2.5 原生質(zhì)體培養(yǎng)及體細(xì)胞融合的染色體加倍方法13-14
• 1.3 化學(xué)誘導(dǎo)染色體加倍技術(shù)14-18
• 1.3.1 常用誘導(dǎo)試劑15
• 1.3.2 常用誘導(dǎo)方法15-16
• 1.3.3 誘導(dǎo)材料的選擇16-17
• 1.3.4 處理濃度和時(shí)間17-18
• 1.4 染色體倍性鑒定方法18-21
• 1.4.1 利用多倍體植物的特征鑒定18-19
• 1.4.2 傳統(tǒng)倍性鑒定方法19
• 1.4.3 流式細(xì)胞術(shù)倍性鑒定19-21
• 1.5 本研究的目的和意義21-22
• 2 材料和方法22-27
• 2.1 材料22
• 2.2 加倍處理方法22-23
• 2.2.1 含秋水仙堿MS培養(yǎng)基制備22-23
• 2.2.2 生根培養(yǎng)基制備23
• 2.2.3 種子加倍處理23
• 2.2.4 經(jīng)加倍處理種子發(fā)芽后處理23
• 2.3 染色體倍性鑒定23-26
• 2.3.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)23-25
• 2.3.2 根尖細(xì)胞壓片觀察25-26
• 2.4 加倍油菜后代細(xì)胞學(xué)及形態(tài)學(xué)觀察26
• 2.4.1 花粉母細(xì)胞行為觀察26
• 2.4.2 花粉活力26
• 2.4.3 形態(tài)學(xué)特征觀察26
• 2.5 數(shù)據(jù)處理分析26-27
• 3 結(jié)果與分析27-47
• 3.1 化學(xué)試劑加倍效果27-31
• 3.1.1 不同秋水仙堿濃度下不同材料種子發(fā)芽率27-28
• 3.1.2 不同秋水仙堿濃度下不同材料存活率28-29
• 3.1.3 不同秋水仙堿濃度下不同材料加倍成功率29-31
• 3.2 秋水仙堿最適濃度篩選31-32
• 3.3 不同材料的加倍效果比較32-33
• 3.4 流式細(xì)胞鑒定技術(shù)研究33-36
• 3.4.1 最佳油菜樣本用量33-34
• 3.4.2 最適裂解液配方34
• 3.4.3 DNA特異性染色液最適用量、濃度及染色時(shí)間34-36
• 3.5 染色體倍性鑒定結(jié)果36-40
• 3.5.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果36-38
• 3.5.2 根尖細(xì)胞觀察38-40
• 3.6 加倍后代花粉活力及細(xì)胞學(xué)觀察40-43
• 3.7 加倍處理后油菜形態(tài)特征43-47
• 3.7.1 秋水仙素對(duì)幼苗生長(zhǎng)的影響43-44
• 3.7.2 秋水仙素處理后植株形態(tài)特征44-47
• 4 討論47-52
• 4.1 加倍受體材料的選擇47-48
• 4.2 秋水仙素對(duì)油菜染色體加倍效果分析48
• 4.3 組培技術(shù)與化學(xué)誘導(dǎo)技術(shù)的結(jié)合48
• 4.4 染色體倍性鑒定方法比較48-50
• 4.5 油菜染色體加倍的應(yīng)用50-52
• 4.5.1 多倍體油菜材料的獲得50
• 4.5.2 加倍后易產(chǎn)生快速穩(wěn)定材料50
• 4.5.3 多倍體可以創(chuàng)造非整倍體50-51
• 4.5.4 染色體多倍體化克服遠(yuǎn)緣雜交不孕不實(shí)性51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 致謝56

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