蜂膠素有“紫色黃金”之稱,含有較多的黃酮和酚酸類物質(zhì),具有抗氧化、消炎、抗癌、抗輻射、抗菌等生物學(xué)活性。但因產(chǎn)量較低、生產(chǎn)周期長(zhǎng)常導(dǎo)致蜂膠市場(chǎng)供不應(yīng)求,加之蜂膠成分復(fù)雜且與楊樹芽成分相似,使它摻假現(xiàn)象層出不窮。隨著蜂膠商品化進(jìn)程的推進(jìn),不法分子常將楊樹芽加工偽裝成蜂膠出售。之前的許多研究中,對(duì)蜂膠中的有效活性成分如酚酸和黃酮等的測(cè)定主要依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),或利用某種方法對(duì)單一的化合物進(jìn)行靶向測(cè)定。本研究是基于代謝組學(xué)技術(shù),采用液質(zhì)聯(lián)用方法對(duì)蜂膠進(jìn)行全面分析,并結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析尋找不同產(chǎn)地原蜂膠和蜂膠產(chǎn)品之間的差異性代謝物,同時(shí)對(duì)蜂膠中的金屬污染物進(jìn)行測(cè)定,為蜂膠及其制品研究提供一定理論基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分,第一部分為蜂膠的代謝組學(xué)研究。采用超高效液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜(UPLC-Q Exactive Obitrap LC-MS)獲得不同產(chǎn)地蜂膠、蜂膠產(chǎn)品的原始數(shù)據(jù),將其導(dǎo)入Compound Discoverer2.1軟件對(duì)樣品總離子流圖中的特征峰進(jìn)行提取,并結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析對(duì)不同樣品進(jìn)行區(qū)分,尋找可能的差異性代謝物;然后利用高分辨質(zhì)譜得到的二級(jí)數(shù)據(jù),結(jié)合Compound Discoverer2.1軟件的數(shù)據(jù)處理,對(duì)代謝物進(jìn)行初步定性;第二部分即樣品的金屬污染物檢測(cè),利用ICP-MS對(duì)樣品中的鋁、錳、鉛、鎘、鉻、砷、鐵等元素進(jìn)行測(cè)定,為合理使用蜂膠產(chǎn)品提供一定理論依據(jù)。第一部分結(jié)果顯示不同蜂膠樣品間均能較好區(qū)分。山東和四川原蜂膠共篩選定性出16種差異性代謝物,山東原蜂膠含有較多的鄰苯二甲醛、異甘草素、3-鄰甲基槲皮素、4,5,6,7-四甲氧基黃酮等物質(zhì),乙基香蘭素丙二醇縮醛、異丁酸香蘭素乙酯和光甘草酚等多分布于四川蜂膠;四川和河北省蜂膠共尋找出16種差異性代謝物,四川蜂膠含有較多的銀杏酸、腰果酸、18-β-甘草次酸等物質(zhì),河北蜂膠中含有較多異紫花前胡內(nèi)酯、2-羥基馬尿酸、洛伐他汀等物質(zhì);山東和河北蜂膠差異性較小,共尋找出11種差異性代謝物,山東蜂膠含有銀杏酸和艾考莫瑞,河北蜂膠含有較多喬松素、櫻花素、異甘草素等物質(zhì)。三省原蜂膠差異性產(chǎn)生的原因可能為蜂膠采集地膠源植物樹脂成分的差異,并輔以環(huán)境和氣候的影響。蜂膠原膠與網(wǎng)購(gòu)蜂膠差異較小,最終定性出11種差異性代謝物,網(wǎng)購(gòu)蜂膠含有較多香豆素類物質(zhì)(蒿屬香豆素、異戊烯氧基呋喃香豆素)、黃酮類物質(zhì)(3-羥基黃酮、喬松素、3-鄰甲基槲皮素)等物質(zhì),蜂膠原膠中咖啡酸、白當(dāng)歸腦、二甲基倒捻子素等3種物質(zhì)含量較多。造成差異的原因?yàn)榉滢r(nóng)對(duì)蜂膠加工程度較輕,且不同產(chǎn)地的蜂膠成分常存在一定差異。蜂膠原膠與蜂膠膠囊具有顯著差異性,共尋找出19種差異性代謝物,包括銀杏酸、綠原酸、肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸、喬松素、異甘草素、4,5,6,7-四甲氧基黃酮等物質(zhì)。其中膠囊中富含莽草素、4,5,6,7-四甲氧基黃酮、阿魏酸松柏酯、β,β-二甲基丙烯酸紫草素、[3,4,6-三乙酰氧基-5-(苯甲氧基)-1-環(huán)己烯]苯甲酸甲酯5種物質(zhì),其余14種物質(zhì)在蜂膠原膠中含量較多。差異性產(chǎn)生的原因?yàn)榉淠z加工過程成分的部分損失和加工輔料的加入等。第二部分結(jié)果顯示蜂膠原膠中Al、Cr、Fe、Ba、Pb含量較多且存在超標(biāo)情況,其他元素如釩(V)、錳(Mn)、鈷(Co)等12種元素的含量相對(duì)較低。隨機(jī)購(gòu)買的10種市售的膠囊產(chǎn)品金屬元素含量均未超過國(guó)家限定標(biāo)準(zhǔn),金屬污染較小。
【學(xué)位單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：S896.6;O657.63
【部分圖文】：

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文12圖1-1CompoundDiscoverer工作流程Fig1-1TheworkflowofCompoundDiscoverer3.2.4多元變量統(tǒng)計(jì)分析多元變量統(tǒng)計(jì)分析能夠在多個(gè)對(duì)象和多個(gè)指標(biāo)互相關(guān)聯(lián)的情況下分析它們的統(tǒng)計(jì)規(guī)律，主要內(nèi)容包括假設(shè)檢驗(yàn)、多元方差分析、多元線性回歸與相關(guān)(Ⅰ)和(Ⅱ)、主成分分析與因子分析、判別分析與聚類分析等。多元變量統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)通常分為兩類：一類為有監(jiān)督的分析，如PLS、PLS-DA、OPLS和OPLS-DA等；另一類為無監(jiān)督的分析，包括過濾式的PCA得分法、嵌入式的MCFS和TRACK等。4本課題的研究目的及內(nèi)容蜂膠具有豐富而獨(dú)特的生物活性物質(zhì)，目前蜂膠摻假現(xiàn)象層出不窮，關(guān)于蜂膠的研究技術(shù)相對(duì)較少且其多為對(duì)蜂膠中主要活性物質(zhì)或單一化合物進(jìn)行靶向鑒別，本實(shí)驗(yàn)基于代謝組學(xué)技術(shù)非靶向?qū)ふ乙唤M差異性代謝物對(duì)蜂膠及其產(chǎn)品進(jìn)行區(qū)分，分析對(duì)象為蜂膠中相

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖2-1陰離子模式下梯度洗脫15min和20min蜂膠的總離子流圖（A：15min，B：20min）Fig.2-1Totalionchromatogramofpropolisaftergradientelutionfor15minand20mininanionmode(A:15min,B:20min)2.4色譜-質(zhì)譜條件2.4.1色譜條件使用ACQUITYUPLCBEHC18色譜柱對(duì)樣品進(jìn)行分析，采用梯度洗脫的方式使樣品中的物質(zhì)得到很好的分離，設(shè)置柱溫為25℃，流速為0.3mL/min，進(jìn)樣量為3μL。洗脫梯度如下：正譜條件流動(dòng)相B為乙腈溶液，流動(dòng)相C為0.1%的甲酸水。其洗脫梯度為0-2min1%B，2-3.25min1%-5%B，3.25-4.25min5%B，2.25-7.75min5%-55%B，7.75-9.75min55%-90%B，9.75-11.75min90%B，11.75-12min90%-1%B，12-15min1%B。負(fù)譜條件流動(dòng)相B為乙腈溶液，流動(dòng)相C為0.1%的甲酸水。其洗脫梯度為0-2min1%B，2-3.25min1%-5%B，3.25-4.25min5%B，2.25-7.75min5%-55%B，7.75-9.75min55%-90%B，9.75-11.75min90%B，11.75-12min90%-1%B，12-15min1%B。2.4.2質(zhì)譜條件表2-3一級(jí)質(zhì)譜條件Table2-3MSconditions負(fù)譜參數(shù)Scantype/掃描類型FullMSScanrange/掃描范圍（m/z）70-1,050B

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文203實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論3.1山東、四川、河北三個(gè)省份的蜂膠原膠數(shù)據(jù)比較本實(shí)驗(yàn)選取的蜂膠為實(shí)際考察過的蜂場(chǎng)中蜂農(nóng)從蜂箱中刮下的原蜂膠，未經(jīng)任何加工處理。后續(xù)實(shí)驗(yàn)中為避免樣品提取不夠充分，采用研磨機(jī)進(jìn)行了粉碎處理。我們對(duì)來自山東、四川和河北三個(gè)不同省份的蜂膠進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，主要包括一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集。其中一級(jí)質(zhì)譜的數(shù)據(jù)采集方式為FullMS，二級(jí)質(zhì)譜分析采用FullMS-ddMS2（TOP5）的掃描方式對(duì)碎片離子信息進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。圖2-2為三個(gè)省份蜂膠的總離子流圖，從樣品總離子流圖上看，三個(gè)地區(qū)的蜂膠樣品并不能得到很好的區(qū)分，于是我們將蜂膠原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入CompoundDiscoverer2.1軟件進(jìn)行分析，得到一級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，再將得到的數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA14.1軟件進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析。在圖2-3中，A為不同省份蜂膠PCA得分圖，從圖中可以看出山東和河北省的蜂膠原膠與四川蜂膠有較好區(qū)分，但山東和河北的蜂膠不能很好分離。于是我們又進(jìn)行了PLS-DA和OPLS-DA分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在PLS-DA和OPLS-DA中，三個(gè)省份的蜂膠分離度較好，且OPLS-DA的置信檢驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn)良好擬合，表明模型可靠，也說明了實(shí)驗(yàn)方法可以將三個(gè)省份蜂膠進(jìn)行區(qū)分的可能性。圖2-2三個(gè)省份蜂膠的總離子流圖(A，山東蜂膠；B，四川蜂膠；C，河北蜂膠)Fig.2-2Totalionchromatogramofpropolisfromthreeprovinces(A,Shandongpropolis;B,Sichuanpropolis;C,Hebeipropolis)ABC
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本文編號(hào)：2885886