發(fā)布時(shí)間：2020-11-14 01:39

　　 蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis, Bt)作為生物農(nóng)藥使用有著長期的歷史,其具有高效、安全、生態(tài)環(huán)保等特點(diǎn),一直都是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。做為商業(yè)使用的Bt菌株,必須具有高效、高產(chǎn)以及安全這三大特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室保存的BtZ01是一株經(jīng)過篩選、具有高效活性的菌株,為使其盡快商業(yè)化,本研究需對其進(jìn)行發(fā)酵條件的優(yōu)化,并以此優(yōu)化數(shù)據(jù)發(fā)酵Bt菌做安全性評價(jià),以期為其生產(chǎn)應(yīng)用提供更準(zhǔn)確的研究數(shù)據(jù)。研究報(bào)道結(jié)果如下：(1)試驗(yàn)采用二次回歸旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)方法優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源、氮源和無機(jī)鹽添加量,同時(shí)對部分發(fā)酵條件作了初步優(yōu)化。通過建立各原料與細(xì)菌總量間的回歸模型,分析各試驗(yàn)因子的單因素效應(yīng)和互作效應(yīng),得到各組分最優(yōu)添加量為：玉米淀粉3.61%,黃豆餅粉3.46%,魚粉1.03%,酵母粉1.13%,蛋白胨0.18%,KH2PO4　0.65%, FeSO40.21%, CaCl2O.21%, AL2(SO4)30.33%, MgSO40.23%。細(xì)菌的最佳培養(yǎng)條件為：發(fā)酵溫度37℃,發(fā)酵初始pH7.5,接種量5%～10%,發(fā)酵時(shí)間44 h-50 h。在此條件下,活菌總量可達(dá)2.7x1010 CFU·mL-1,芽孢率達(dá)80%。(2)為了觀察BtZ01菌株對小鼠胚胎發(fā)育和胚后生長發(fā)育的影響,將48只孕鼠隨機(jī)分組,試驗(yàn)組飼喂?jié)舛确謩e為106 CFU·mL-1、108 CFU·mL-1、5 × 109 CFU· mL-1的BtZ01菌液,并設(shè)滅菌水為對照組。采用行為致畸學(xué)方法檢查BtZ01對小鼠胚胎和胚后發(fā)育的影響并制作臟器切片,測量臟器指數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果表明,與對照組相比,各試驗(yàn)組小鼠在胚胎和胚后發(fā)育各階段體重和體長無顯著差異(P0.05),胚胎畸形發(fā)生率無增加,骨骼染色觀察發(fā)現(xiàn)高劑量組小鼠后囟門顯著大于其它3組(P0.05)。18 d與48d小鼠部分臟器指數(shù)雖存在顯著差異,但卻僅有高劑量組腎臟被發(fā)現(xiàn)有病變。小鼠腸道形態(tài)在18d時(shí)無顯著差異(P0.05),但在48 d時(shí),高、中劑量組小鼠的腸絨毛高度和絨毛長度／隱窩深度值顯著高于對照組(P0.05)。小鼠腸道菌群檢測并未出現(xiàn)失調(diào)現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)果表明,蘇云金芽孢桿菌BtZ01在濃度為108 CFU·mL-1及以下時(shí)對小鼠胚胎發(fā)育及胚后生長發(fā)育無不良影響。
【學(xué)位單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S482
【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 生物農(nóng)藥與害蟲防治
    2 蘇云金芽孢桿菌
        2.1 蘇云金芽孢桿菌的活性成分
        2.2 蘇云金芽孢桿菌的殺蟲機(jī)制
        2.3 蘇云金芽孢桿菌的應(yīng)用研究
    3 蘇云金芽孢桿菌安全性研究進(jìn)展
        3.1 蘇云金芽孢桿菌對哺乳動物的安全性評價(jià)
        3.2 轉(zhuǎn)蘇云金芽孢桿菌基因作物安全性評價(jià)
        3.3 蘇云金芽孢桿菌生態(tài)安全評價(jià)
    4 蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵優(yōu)化研究進(jìn)展
        4.1 正交設(shè)計(jì)
        4.2 均勻設(shè)計(jì)
        4.3 響應(yīng)面分析
        4.4 遺傳算法與人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)
    5 本項(xiàng)目研究的目的與意義
第二章 蘇云金芽孢桿菌BtZ01的發(fā)酵優(yōu)化
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 菌株
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 試劑
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 菌株活化
        2.2 碳源及氮源的優(yōu)化
        2.3 無機(jī)鹽的優(yōu)化
        2.4 發(fā)酵條件優(yōu)化
    3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.1 碳、氮源優(yōu)化結(jié)果
        3.2 無機(jī)鹽優(yōu)化結(jié)果
        3.3 發(fā)酵條件優(yōu)化結(jié)果
        3.4 優(yōu)化結(jié)果驗(yàn)證
    4 討論
    5 結(jié)論
第三章 蘇云金芽孢桿菌對小鼠胚胎及胚后生長發(fā)育的影響
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 菌株
        1.2 試劑
        1.3 試驗(yàn)動物
        1.4 小鼠日糧及營養(yǎng)水平
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 Bt菌懸液的制備
        2.2 動物飼養(yǎng)與劑量分組
        2.3 母鼠和胎鼠的觀察
        2.4 胚后小鼠的生長發(fā)育觀察
        2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.1 Bt菌劑對懷孕母鼠及胚胎小鼠的影響
        3.2 Bt菌劑對胎后小鼠斷奶時(shí)生長發(fā)育的影響
        3.3 Bt菌劑對胎后小鼠成年時(shí)生長發(fā)育的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 任改新;李克田;楊明華;易興民;;昆蟲病原菌蘇云金芽孢桿菌群(Bacillus thuringiensis Group)的分類[J];微生物學(xué)報(bào);1975年04期

2 李超峰;;蘇云金芽孢桿菌殺蟲活性的增效機(jī)制研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)進(jìn)展;2018年01期

3 張航;;蘇云金芽孢桿菌的研究進(jìn)展[J];黑龍江科技信息;2016年34期

4 王波;;蘇云金芽孢桿菌對茄二十八星瓢蟲毒性測定[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年07期

5 曹瓊;倪超超;;蘇云金芽孢桿菌的生物防治安全性研究進(jìn)展[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年11期

6 王立;劉利檬;張思雅;;土壤中蘇云金芽孢桿菌的分離純化與初步鑒定[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問;2010年07期

7 唐建霞;趙松;戴洋;顧曉紅;劉琴;徐健;管曉虹;朱蔭昌;;蘇云金芽孢桿菌以色列亞種毒性蛋白基因的克隆及其原核表達(dá)[J];中國血吸蟲病防治雜志;2009年02期

8 陳在佴;吳繼星;;蘇云金芽孢桿菌“94001”菌株發(fā)酵工藝的優(yōu)化[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年03期

9 蘇旭東;檀建新;張偉;林揚(yáng);;蘇云金芽孢桿菌的分離與鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年19期

10 趙玉艷,蔡磊明;轉(zhuǎn)蘇云金芽孢桿菌基因作物安全性研究[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2004年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 吳燕榕;蘇云金芽孢桿菌vip3A基因及殺蟲防病工程菌研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2004年

2 宋福平;蘇云金芽孢桿菌cry1le1和cry8基因的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2003年

3 黃志鵬;蘇云金芽孢桿菌WB9的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2005年

4 黃必旺;蘇云金芽孢桿菌的腸毒素及其安全性研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2005年

5 羅蘭;蘇去金桿菌的分離、cry/cyt基因鑒定及殺線蟲活性的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

6 黃天培;蘇云金芽孢桿菌的重要功能基因[D];福建農(nóng)林大學(xué);2006年

7 張靈玲;蘇云金芽孢桿菌LLP29菌株的分離及其對白紋伊蚊作用機(jī)理的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2007年

8 黃勤清;蘇云金芽孢桿菌新助劑篩選及發(fā)酵因子優(yōu)化[D];福建農(nóng)林大學(xué);2006年

9 郎志宏;蘇云金芽孢桿菌cry8Ca2基因的活性分析及在轉(zhuǎn)基因煙草中的表達(dá)[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2005年

10 鄭毅;蘇云金芽孢桿菌FS140菌株蛋白酶的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳波;蘇云金芽孢桿菌BtZ01的發(fā)酵優(yōu)化及其對小鼠胚胎和胚后生長發(fā)育的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 張嘯天;蘇云金芽孢桿菌復(fù)合生物殺蟲劑防治美國白蛾的增效作用及復(fù)配制劑的研制[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

3 李煥發(fā);蘇云金芽孢桿菌4.0718中營養(yǎng)期殺蟲蛋白的研究[D];湖南師范大學(xué);2007年

4 劉奇瑋;家蠶對蘇云金芽孢桿菌免疫反應(yīng)的基因表達(dá)譜研究[D];江西農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 王艷敏;AHL酶基因的克隆及序列分析[D];河北工業(yè)大學(xué);2005年

6 曹放亮;蘇云金芽孢桿菌兩類殺蟲蛋白的遺傳改良和抗蟲性評價(jià)[D];浙江大學(xué);2012年

7 毛文杰;蘇云金芽孢桿菌殺蟲基因的克隆和殺蟲假單胞工程菌的構(gòu)建[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

8 彭正寧;生孢噬纖維菌、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌三元融合子構(gòu)建及RAPD分析[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

9 王小顯;蘇云金芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌在葉際的行為及生態(tài)效應(yīng)研究[D];南京大學(xué);2013年

10 郭巍;蘇云金芽孢桿菌cry2Aa基因克隆及表達(dá)的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2000年

本文編號：2882907