奶牛乳房炎是現(xiàn)代奶牛養(yǎng)殖業(yè)的常見臨床性疾病,乳房炎的發(fā)生會造成奶牛產奶量降低、乳品質下降,進而影響?zhàn)B殖者的經(jīng)濟效益,同時也會對消費者的健康造成一定的危害。治療藥物的使用不僅會影響牛奶品質,同時也會促使病原菌產生耐藥性,因此挖缺疾病的抗性基因,對于乳房炎的早期診斷和預防,減少發(fā)病率,降低飼養(yǎng)成本,提高生產性能具有重要意義。本試驗通過鑒定中國荷斯坦奶牛炎癥反應相關基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP),驗證其與奶牛泌乳性能及乳房炎發(fā)生的相關性,從基因水平鑒定有效的奶牛乳房炎抗性分子標記位點,為后期抗性因子的分子調控機制研究奠定基礎,也為奶牛乳房炎的早期診斷、預防和治療提供依據(jù)。本試驗以某奶牛養(yǎng)殖場320頭泌乳牛血液為研究材料,提取血液基因組DNA,用直接測序法對多個炎癥反應相關基因的SNP位點進行驗證及篩選。最后選取Toll樣受體1(TLR1)、Cbl原癌基因B(CBLB)、趨化因子配體2(CXCL2)的SNPs位點進行基因分型鑒定。并計算相關SNP位點的遺傳參數(shù),用SPSS 21.0軟件對獲得的SNP位點與奶牛乳房炎發(fā)生及產奶性能進行關聯(lián)分析。結果如下:在TLR1基因中,發(fā)現(xiàn)C~(1424)A、A~(1475)C、G~(1496)A和G~(1550)A共4個SNP位點。對比測序結果和是否存在限制性內切酶發(fā)現(xiàn),C~(1424)A、A~(1475)C、和G~(1550)A三個位點不適用本試驗,因此本試驗以G~(1496)A位點進行關聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)該位點與奶牛乳脂率、體細胞數(shù)(SCC)及乳房炎臨床發(fā)病率呈極顯著相關(P?0.01)。在CBLB基因中,發(fā)現(xiàn)1個SNP位點G~(222406)T。通過關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn),GG型的SCC極顯著高于TT型SCC(P?0.01),GT型與GG型和TT型之間差異不顯著(P0.05)。在CXCL2基因中,發(fā)現(xiàn)G~(268)A、C~(279)T、C~(316)G和G~(468)A共4個SNP位點。對比測序結果和是否存在限制性內切酶發(fā)現(xiàn),G~(268)A、C~(316)G和G~(468)A三個位點不適用本試驗,因此以C~(279)T位點進行關聯(lián)性分析,發(fā)現(xiàn)該位點CC型和TT型之間與SCC沒有顯著相關性(P0.05),CC型和TT型的SCC極顯著高于CT型的SCC(P?0.01)。綜上所述,通過對TLR1、CBLB和CXCL2的基因多態(tài)性及其與生產性能及乳房炎發(fā)生的相關性分析表明,TLR1基因的G~(1496)A位點、CBLB基因的G~(222406)T位點、CXCL2基因的C~(279)T位點,分別與奶牛乳脂率及體細胞數(shù)及乳房炎發(fā)病率呈顯著相關,可作為乳房炎奶�？剐苑肿虞o助選擇的候選標記因子。
【學位單位】：黑龍江八一農墾大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2020
【中圖分類】：S858.23
【部分圖文】：

結果與分析173結果與分析3.1DNA提取結果檢測3.1.1紫外分光光度計檢測取出1μL的DNA樣品，并用紫外分光光度計檢測濃度和OD260/280的比值。檢測到的DNA濃度與標準一致，比值均在1.8-2.0之間，表明該DNA是高純度的，并且符合使用要求，如表3-1所示。表3-1牛血液DNA提取濃度Table3-1BloodDNAextractionconcentrationofthedairycows牛號濃度（μg/μL）260/230260/2801611966.51.771.801505465.41.831.721523777.81.801.791708258.31.731.871319868.31.791.761614978.21.751.831614969.11.821.901611966.51.831.803.1.2瓊脂糖凝膠電泳檢測用1%瓊脂糖凝膠電泳法對所提取的牛血液基因組DNA條帶進行PCR檢測，檢測結果表明，DNA條帶清晰且單一，符合試驗要求，可以用作后續(xù)試驗。如圖3-1。圖3-1牛血液DNA基因組PCR檢測圖Fig.3-1DairycowsbloodDNAgenomePCRmap注：M為Marker；泳道1為陰性對照；泳道2-11為牛血液DNA。

良好且清晰單一，可以滿足試驗和后續(xù)測序的要求。CBLB 基因引物的擴增片段大小為 1240 bp（圖 3-3），與目標片段一致，條帶特異性良好且清晰單一，可以滿足試驗和后續(xù)測序的要求。CXCL2 基因引物的擴增片段大小為 875 bp（圖 3-4），與目標片段一致，條帶特異性良好且清晰單一，可以滿足試驗和后續(xù)測序的要求。IL-12B、IL-17A、IL-18、TLR2、PYCR1、CXCL1 基因部分片段引物 PCR 擴增結果如圖 3-5，與設計的目的片段已知，特異性良好且條帶單一，符合試驗需求，可用于后續(xù)測序使用。

CBLB基因引物PCR產物電泳圖
【參考文獻】

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