本文關(guān)鍵詞：黃粉蟲抗菌肽誘導(dǎo)方法的比較及實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了給黃粉蟲抗菌肽研究提供新的參考,探索黃粉蟲抗菌肽的較優(yōu)誘導(dǎo)方法,本論文以不同齡期的黃粉蟲幼蟲為試驗(yàn)材料,以大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作為誘導(dǎo)菌,微量注射、飼喂和針刺作為誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)黃粉蟲幼蟲產(chǎn)生抗菌肽,對(duì)不同菌液濃度和不同方法誘導(dǎo)的不同齡期黃粉蟲幼蟲抗菌肽的抑菌效果進(jìn)行研究,同時(shí)還進(jìn)行了黃粉蟲抗菌肽Tenecin 1、Tenecin 3、Tenecin 4 及ColeoptericinC四個(gè)基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究。結(jié)果如下：1、不同齡期的黃粉蟲幼蟲產(chǎn)生的抗菌肽抑菌活性上存在差異。采用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作為誘導(dǎo)菌,對(duì)8齡、9齡和10齡的黃粉蟲幼蟲進(jìn)行誘導(dǎo)后,發(fā)現(xiàn)其抗菌肽抑菌活性存在差異,在所有的誘導(dǎo)處理中,9齡幼蟲的誘導(dǎo)效果好于8齡和10齡。2、不同菌液濃度誘導(dǎo)黃粉蟲幼蟲產(chǎn)生的抗菌肽抑菌活性上存在差異。將對(duì)數(shù)期濃度稀釋10倍、100倍、1000倍,經(jīng)3種不同濃度的菌液誘導(dǎo)后發(fā)現(xiàn),在所有的不同菌液濃度誘導(dǎo)處理中,菌液濃度為對(duì)數(shù)期濃度的稀釋100倍時(shí)效果較好。3、不同方法誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗菌肽抑菌活性上存在差異。經(jīng)相同濃度菌液誘導(dǎo)后發(fā)現(xiàn),在所有的相同濃度菌液不同誘導(dǎo)方法處理中,微量注射誘導(dǎo)的效果較好。4、黃粉蟲抗菌肽Tenecin基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR結(jié)果。通過對(duì)黃粉蟲抗菌肽的Tenecin 1、Tenecin 3.Tenecin 4 和ColeoptericinC4個(gè)基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析后發(fā)現(xiàn),除Tenecin 3基因經(jīng)大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)量下調(diào)外,其他抗菌肽基因都上調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：黃粉蟲 抗菌肽 抑菌 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S433
【目錄】：

• 摘要8-9
• Abstract9-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-17
• 1 黃粉蟲的研究進(jìn)展10-12
• 1.1 黃粉蟲生活史10
• 1.2 黃粉蟲開發(fā)與利用10-12
• 1.2.1 在食用方面11
• 1.2.2 在飼用、肥料方面11-12
• 1.2.3 在藥用方面12
• 1.2.4 在其他方面12
• 2 抗菌肽的研究12-15
• 2.1 抗菌肽的概況12-13
• 2.2 抗菌肽的類型13-14
• 2.2.1 天然來源抗菌肽13
• 2.2.2 化學(xué)合成的抗菌肽13
• 2.2.3 基因工程來源的抗菌肽13-14
• 2.2.4 酶解獲得的抗菌肽14
• 2.3 抗菌肽的生物學(xué)特性14
• 2.4 黃粉蟲抗菌肽的研究14-15
• 3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的研究15-16
• 4 本文研究的目的與意義16-17
• 第二章 黃粉蟲抗菌肽的誘導(dǎo)17-36
• 1 試驗(yàn)材料17-19
• 1.1 供試?yán)ハx與菌種17
• 1.2 主要儀器與試劑17-18
• 1.2.1 主要儀器17
• 1.2.2 主要試劑17-18
• 1.3 培養(yǎng)基的配置18
• 1.4 試劑和緩沖液的配置18
• 1.5 菌種的活化18
• 1.6 蟲齡的選擇18-19
• 2 試驗(yàn)方法19-22
• 2.1 黃粉蟲抗菌肽的誘導(dǎo)19-21
• 2.1.1 不同濃度菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)19-20
• 2.1.1.1 微量注射不同濃度菌液對(duì)抗菌肽的誘導(dǎo)19
• 2.1.1.2 飼喂不同濃度菌液對(duì)抗菌肽的誘導(dǎo)19
• 2.1.1.3 針刺不同濃度菌液對(duì)抗菌肽的誘導(dǎo)19-20
• 2.1.2 特定濃度菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)20-21
• 2.1.2.1 微量注射不同菌液量對(duì)抗菌肽的誘導(dǎo)20
• 2.1.2.2 飼喂不同比例的菌液與飼料對(duì)抗菌肽的誘導(dǎo)20
• 2.1.2.3 針刺不同次數(shù)對(duì)抗菌肽的誘導(dǎo)20-21
• 2.2 抗菌肽的提取21
• 2.3 抑菌試驗(yàn)21
• 2.4 數(shù)據(jù)處理方法21-22
• 3 結(jié)果與分析22-34
• 3.1 微量注射不同濃度菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)22-24
• 3.1.1 微量注射不同濃度大腸桿菌菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)22-23
• 3.1.2 微量注射不同濃度金黃色葡萄球菌對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)23-24
• 3.2 飼喂不同濃度菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)24-26
• 3.2.1 飼喂不同濃度大腸桿菌菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)24-25
• 3.2.2 飼喂不同濃度金黃色葡萄球菌菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)25-26
• 3.3 針刺不同濃度菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)26-28
• 3.3.1 針刺不同濃度大腸桿菌菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)26-27
• 3.3.2 針刺不同濃度金黃色葡萄球菌菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)27-28
• 3.4 微量注射相同濃度菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)28-30
• 3.4.1 微量注射大腸桿菌菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)28-29
• 3.4.2 微量注射金黃色葡萄球菌對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)29-30
• 3.5 飼喂不同比例菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)30-32
• 3.5.1 飼喂不同比例大腸桿菌菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)30-31
• 3.5.2 飼喂金黃色葡萄球菌菌液對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)31-32
• 3.6 不同針刺次數(shù)對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)32-34
• 3.6.1 針刺大腸桿菌對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)32-33
• 3.6.2 針刺金黃色葡萄球菌對(duì)黃粉蟲幼蟲抗菌肽的誘導(dǎo)33-34
• 4 小結(jié)與討論34-36
• 4.1 不同齡期幼蟲誘導(dǎo)效果比較34
• 4.2 不同濃度菌液誘導(dǎo)效果比較34
• 4.3 不同菌液與飼料比例誘導(dǎo)效果比較34-35
• 4.4 不同誘導(dǎo)方法效果比較35-36
• 第三章 黃粉蟲抗菌肽Tenecin、Coleoptericin基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR分析36-51
• 1 試驗(yàn)材料36-37
• 1.1 供試?yán)ハx與菌種36
• 1.2 主要儀器與試劑36-37
• 1.2.1 主要儀器36-37
• 1.2.2 主要試劑37
• 2 試驗(yàn)方法37-41
• 2.1 黃粉蟲總RNA的提取37-38
• 2.2 目的基因的引物設(shè)計(jì)38-39
• 2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)39-41
• 2.3.1 RNA反轉(zhuǎn)錄39
• 2.3.2 熒光定量PCR檢測(cè)39-41
• 2.3.2.1 實(shí)驗(yàn)樣本39
• 2.3.2.2 PCR反應(yīng)步驟39-40
• 2.3.2.3 儀器的操作40-41
• 3 結(jié)果與分析41-50
• 3.1 內(nèi)參基因?qū)崟r(shí)熒光定量結(jié)果41-42
• 3.2 目的基因Tenecin 1實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果42-44
• 3.3 目的基因Tenecin 3實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果44-46
• 3.4 目的基因Tenecin 4實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果46-48
• 3.5 目的基因Coleoptericin C實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果48-50
• 4 小結(jié)與討論50-51
• 第四章 總結(jié)與討論51-54
• 1 主要結(jié)論51
• 1.1 黃粉蟲抗菌肽誘導(dǎo)方法比較51
• 1.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析51
• 2 討論51-52
• 3 本研究的創(chuàng)新與不足52-53
• 4 展望53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 附錄Ⅰ58-61
• 附錄Ⅱ61-64
• 致謝64

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5 廖富，

本文編號(hào)：284905