本文關(guān)鍵詞：山西省奶牛乳腺炎病原及診斷技術(shù)的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)養(yǎng)牛戶(hù)和規(guī)模化養(yǎng)牛場(chǎng)的1500頭奶牛的調(diào)研,分析了山西省奶牛乳腺炎的發(fā)病情況以及引起該病的主要病原菌；采用PCR等分子生物學(xué)手段,檢測(cè)研究了引起山西省奶牛乳腺炎的主要病原菌,將多病原檢測(cè)的PCR檢測(cè)條件予以?xún)?yōu)化篩選,對(duì)多重PCR情況進(jìn)行確定,在此基礎(chǔ)上,研究了這些微生物的特異性和敏感性。結(jié)果表明：1、調(diào)查發(fā)現(xiàn)了與引起山西省奶牛乳腺炎相關(guān)的病原菌9種159株細(xì)菌,經(jīng)鑒定證明的這些微生物約79%是大腸桿菌、鏈球菌及葡萄球菌。對(duì)上述微生物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示,上述三種微生物對(duì)廣譜抗生素多西環(huán)素(Doxycycline),以及潔霉素、左氧氟沙星、頭孢曲松鈉等抗菌藥物呈中度或高度敏感,而對(duì)氨芐西林、鏈霉素或丁胺卡那霉素顯示無(wú)敏感性或低敏感。2、多重PCR檢測(cè)結(jié)果表明,用于擴(kuò)增菌株引物的最佳濃度是：大腸桿菌的引物終濃度為0.75～1.0μmol/L,金黃色葡萄球菌引物終濃度為1.25～2.0μmol/L,無(wú)乳鏈球菌的引物終濃度為1.5～1.75μ/L;最適退火溫度是：大腸桿菌菌株為46.3～53.3℃，金黃色葡萄球菌菌株為55.3～57.6℃,無(wú)乳鏈球菌菌株為49.4～55.3℃；擴(kuò)增dNTP最適終濃度是：大腸桿菌為0.075～0.3mmol/L,金黃色葡萄球?yàn)?.15mmol/L,無(wú)乳鏈球菌為0.1～0.2mmol/L。分別將大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株、金黃色葡萄球菌菌株以及無(wú)乳鏈球菌菌株用其自身引物優(yōu)化后的條件進(jìn)行PCR單重?cái)U(kuò)增,結(jié)果依次顯示在544 bp.439bp、162bp處見(jiàn)有與設(shè)計(jì)一致的核酸擴(kuò)增片段。3、對(duì)于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和無(wú)乳鏈球菌分別用PCR檢測(cè)法與細(xì)菌培養(yǎng)法方法鑒定出現(xiàn)顯著差異,由此可見(jiàn),對(duì)上述細(xì)菌檢測(cè)的靈敏度PCR法優(yōu)于細(xì)菌培養(yǎng)法,說(shuō)明PCR更適于于奶牛場(chǎng)及質(zhì)量檢查監(jiān)督單位的實(shí)際需要。綜上,大腸桿菌、葡萄球菌和鏈球菌是造成山西省規(guī)�；膛�(chǎng)及養(yǎng)牛戶(hù)奶牛乳腺炎的主要病原,這些微生物對(duì)多西環(huán)素(Doxycycline)、潔霉素、頭孢曲松鈉、左氧氟沙星敏感；PCR檢測(cè)和細(xì)菌培養(yǎng)法均可用于金黃色葡萄球菌的鑒定,且PCR法更為靈敏、更適合奶牛場(chǎng)及乳品質(zhì)量的檢測(cè)監(jiān)控。
【關(guān)鍵詞】：奶牛 乳腺炎 病原菌 分離鑒定 多重PCR
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S858.23
【目錄】：

• 摘要8-9
• 前言9-10
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述10-16
• 1 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀10-12
• 1.1 奶牛乳腺炎的研究進(jìn)展10-11
• 1.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)11-12
• 2 研究目的12
• 3 主要研究?jī)?nèi)容12-13
• 4 技術(shù)路線13
• 5 主要解決的關(guān)鍵技術(shù)與創(chuàng)新點(diǎn)13-14
• 5.1 關(guān)鍵技術(shù)13
• 5.2 存在問(wèn)題和改進(jìn)意見(jiàn)13-14
• 5.3 創(chuàng)新點(diǎn)14
• 6 取得的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益及推廣應(yīng)用前景14-16
• 第二部分 試驗(yàn)部分16-39
• 試驗(yàn)一 山西省奶牛乳腺炎病原菌的分離及其生物學(xué)特性的鑒定16-22
• 1 材料與方法16-17
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物16
• 1.2 主要試劑16
• 1.2.1 培養(yǎng)基16
• 1.2.2 藥敏紙片16
• 1.3 試驗(yàn)方法16-17
• 2 試驗(yàn)結(jié)果17-20
• 2.1 山西省奶牛乳腺炎致病菌的分離鑒定17-18
• 2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果18-20
• 3 討論20-21
• 3.1 山西省奶牛場(chǎng)奶牛乳腺炎致病菌的分離鑒定結(jié)果分析20
• 3.2 奶牛乳腺炎的療效分析20-21
• 4 小結(jié)21-22
• 試驗(yàn)二 乳腺炎致病菌的分子生物學(xué)鑒定22-31
• 1 材料與方法22-25
• 1.1 試驗(yàn)菌株22
• 1.2 主要儀器及試劑22
• 1.2.1 主要儀器22
• 1.2.2 主要試劑22
• 1.3 試驗(yàn)方法22-25
• 1.3.1 病原體DNA提取22-23
• 1.3.2 引物的設(shè)計(jì)與合成23-24
• 1.3.3 PCR反應(yīng)24
• 1.3.4 三種致病菌單重PCR的特異性試驗(yàn)24
• 1.3.5 三種致病菌單重PCR方法靈敏性的確定24
• 1.3.6 PCR擴(kuò)增及條件優(yōu)化24-25
• 2 試驗(yàn)結(jié)果25-29
• 2.1 PCR擴(kuò)增退火溫度的優(yōu)化結(jié)果25-26
• 2.2 PCR擴(kuò)增引物濃度的優(yōu)化結(jié)果26-27
• 2.3 PCR擴(kuò)增DNTP濃度的優(yōu)化結(jié)果27-28
• 2.4 PCR擴(kuò)增特異性結(jié)果28
• 2.5 PCR擴(kuò)增敏感性結(jié)果28-29
• 3 討論29-30
• 3.1 乳樣中不同病原菌的多重PCR檢測(cè)結(jié)果29-30
• 3.2 PCR引物的設(shè)計(jì)及片段擴(kuò)增30
• 4 小結(jié)30-31
• 試驗(yàn)三 多重PCR檢測(cè)與細(xì)菌培養(yǎng)法對(duì)乳腺炎病原診斷的效果31-39
• 1 試驗(yàn)材料與方法31-32
• 1.1 奶樣的采集31
• 1.2 試驗(yàn)主要儀器及試劑31
• 1.2.1 主要儀器31
• 1.2.2 主要試劑31
• 1.3 試驗(yàn)方法31-32
• 1.3.1 乳樣中細(xì)菌的檢測(cè)鑒定31-32
• 1.3.2 藥敏試驗(yàn)32
• 1.3.3 乳樣中細(xì)菌DNA的提取32
• 1.3.4 引物的設(shè)計(jì)及PCR擴(kuò)增32
• 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法32
• 2 試驗(yàn)結(jié)果32-38
• 2.1 乳樣細(xì)菌培養(yǎng)與多重PCR檢測(cè)結(jié)果的比較32-33
• 2.2 多重PCR和細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)法對(duì)3種病原菌檢測(cè)結(jié)果的比較33-38
• 3 討論38-39
• 3.1 多重PCR與細(xì)菌培養(yǎng)靈敏性對(duì)比38
• 3.2 多重PCR技術(shù)分析38-39
• 4 小結(jié)39
• 全文結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• Abstract44-46
• 致謝46

【相似文獻(xiàn)】

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8 王春t

本文編號(hào)：269843