【摘要】：隨著生活水平的不斷提高,人們越來越關(guān)注營養(yǎng)健康與食品安全,果品因其高營養(yǎng)價值在食品生產(chǎn)和消費(fèi)中占較大比重,而果品上的農(nóng)藥殘留也成為食品安全工作中關(guān)注的重點(diǎn)。農(nóng)藥具有神經(jīng)毒性、免疫毒性、生殖發(fā)育毒性等多種潛在毒性,過量或長期使用會在環(huán)境和食物中產(chǎn)生殘留,通過飲食和環(huán)境進(jìn)入人體會對健康造成極大威脅。近年來為了提高藥效、降低害蟲的抗藥性,達(dá)到更好的防治效果,農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中常常復(fù)配、交替或混合施用多種農(nóng)藥,如有機(jī)磷和擬除蟲菊酯農(nóng)藥的復(fù)配,這導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中可能會同時殘留多種不同的農(nóng)藥,人們也不可避免地持續(xù)暴露于復(fù)雜的農(nóng)藥混合物中,因此,不同農(nóng)藥之間的聯(lián)合毒性及其作用機(jī)制也逐漸受到關(guān)注。此外,傳統(tǒng)的農(nóng)藥毒理學(xué)研究大多采用活體動物試驗(yàn),但是動物試驗(yàn)耗時、耗力、花費(fèi)大,而離體細(xì)胞培養(yǎng)方法具有快速、簡便、成本低等優(yōu)點(diǎn),成為近年來農(nóng)藥安全性評價的常用方法。有機(jī)磷農(nóng)藥水胺硫磷和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥甲氰菊酯是果品中檢出率較高的兩種農(nóng)藥,他們同屬于典型的神經(jīng)毒劑,研究其聯(lián)合效應(yīng)有利于今后相關(guān)殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的制定和農(nóng)藥安全性評價。本論文以敏感細(xì)胞人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y為試驗(yàn)對象,首先以細(xì)胞存活率為毒性指標(biāo),研究了水胺硫磷和甲氰菊酯單一及復(fù)合暴露對其產(chǎn)生的細(xì)胞毒性,并利用聯(lián)合指數(shù)法(CI)評價了兩種農(nóng)藥對細(xì)胞毒性的聯(lián)合效應(yīng)。同時,以細(xì)胞形態(tài)和AChE活力為毒性觀測指標(biāo),研究了兩種農(nóng)藥單一及復(fù)合暴露對該細(xì)胞產(chǎn)生的神經(jīng)毒性,并評價了兩種農(nóng)藥對細(xì)胞神經(jīng)毒性的聯(lián)合效應(yīng)。此外,本論文還通過測定細(xì)胞內(nèi)ROS水平、SOD活力、CAT活力、MDA含量及Nrf2基因相對表達(dá)量等毒性指標(biāo),研究了兩種農(nóng)藥單一及復(fù)合暴露對SH-SY5Y細(xì)胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激效應(yīng),并評價了兩種農(nóng)藥對細(xì)胞氧化應(yīng)激的聯(lián)合效應(yīng)。主要研究結(jié)果如下:(1)水胺硫磷和甲氰菊酯在不同濃度、不同時間下單一及復(fù)合暴露時均會誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性,導(dǎo)致細(xì)胞存活率的下降,且SH-SY5Y細(xì)胞毒性與兩種農(nóng)藥的暴露濃度、暴露時間均呈正相關(guān)關(guān)系。其中,水胺硫磷在12 h、24 h、48 h和72 h下對SH-SY5Y細(xì)胞的半數(shù)致死濃度分別為201.06μmol/L、116.78μmol/L、53.12μmol/L和19.72μmol/L,甲氰菊酯在12 h、24 h、48 h和72 h下對SH-SY5Y細(xì)胞的半數(shù)致死濃度分別為227.70μmol/L、150.94μmol/L、56.79μmol/L和21.30μmol/L。水胺硫磷的細(xì)胞毒性略強(qiáng)于甲氰菊酯。(2)水胺硫磷和甲氰菊酯在不同濃度下單一及復(fù)合暴露24 h均會誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞產(chǎn)生神經(jīng)毒性,導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生密度下降、胞體先拉長后皺縮變圓、神經(jīng)軸突先生長后變短脫落等形態(tài)學(xué)改變,同時不同程度的抑制SH-SY5Y細(xì)胞的AChE活力。水胺硫磷的神經(jīng)毒性強(qiáng)于甲氰菊酯。(3)水胺硫磷和甲氰菊酯在不同濃度下單一及復(fù)合暴露24 h均會誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激效應(yīng),激發(fā)SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)ROS的釋放,誘導(dǎo)ROS水平升高,同時抑制細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)中的SOD、CAT活力,進(jìn)而加重氧化損傷程度,發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)并激活細(xì)胞Nrf2信號通路,最終導(dǎo)致細(xì)胞MDA含量的升高和Nrf2基因相對表達(dá)水平的上調(diào)。甲氰菊酯誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激效應(yīng)比水胺硫磷更強(qiáng)。(4)在本試驗(yàn)設(shè)定濃度下暴露24 h,水胺硫磷和甲氰菊酯對SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞毒性及氧化應(yīng)激效應(yīng)的聯(lián)合作用均呈現(xiàn)協(xié)同效應(yīng),導(dǎo)致兩種農(nóng)藥的等濃度混合物對該細(xì)胞存活率、SOD活力和CAT活力產(chǎn)生的毒性均強(qiáng)于兩種農(nóng)藥單一使用,但對其神經(jīng)毒性指標(biāo)AChE活力抑制的聯(lián)合作用隨著混合物暴露濃度的增大先后呈現(xiàn)協(xié)同、相加和拮抗效應(yīng)。本論文的研究結(jié)果可為有機(jī)磷農(nóng)藥水胺硫磷和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥甲氰菊酯的毒理學(xué)研究提供了數(shù)據(jù)支持,同時也為有機(jī)磷和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留混合污染風(fēng)險評估提供了一定的參考。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TS201.6;TQ450.26

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2424863