發(fā)布時(shí)間：2019-01-30 08:42

【摘要】：本研究工作由兩部分組成,第一部分是關(guān)于油菜BAC文庫(kù)的構(gòu)建以及相關(guān)克隆的篩選;第二部分是水稻BAC克隆BIBAC亞克隆的構(gòu)建和相關(guān)克隆的篩選。細(xì)菌人工染色體(bacterial artificial chromosome,BAC)文庫(kù)和人工雙元染色體(binary bacterial artificial chromosome,BIBAC)文庫(kù)在基因組的研究方面扮演了重要的角色。油菜是一種重要的農(nóng)作物,具有很好的經(jīng)濟(jì)效益。通過(guò)油菜菜籽榨取的植物油不僅飽和脂肪酸的含量低而且還含有多種氨基酸、維生素,非常有益于人體的健康。本研究中,利用中國(guó)農(nóng)科院油料作物研究所師家勤副研究員提供的油菜葉片,構(gòu)建了一個(gè)油菜的BAC文庫(kù),用于相關(guān)基因的篩選和克隆。油菜BAC文庫(kù)總計(jì)103,680個(gè)克隆,存放在270個(gè)384孔板中,文庫(kù)平均插入片段大小為122.6kb,按油菜基因組1000M計(jì)算,覆蓋油菜基因組12.5倍,空載率低于2%,無(wú)細(xì)胞器污染;利用連鎖標(biāo)記,對(duì)整個(gè)油菜BAC文庫(kù)進(jìn)行篩選,成功地篩選到4個(gè)陽(yáng)性克隆,這些克隆攜帶了與油菜性狀相關(guān)的基因。該部分工作對(duì)于通過(guò)遺傳改良提高油菜的產(chǎn)量和品質(zhì)具有特殊的意義。BAC載體不能用來(lái)直接轉(zhuǎn)化植物,需借助BIBAC載體,通過(guò)BIBAC載體構(gòu)建的亞克隆文庫(kù),能夠直接轉(zhuǎn)化植株。利用Sau3AI內(nèi)切酶對(duì)水稻BAC文庫(kù)中篩選出來(lái)的陽(yáng)性克隆進(jìn)行部分酶切,構(gòu)建了一個(gè)水稻BIBAC亞克隆文庫(kù)。該文庫(kù)共768個(gè)克隆,平均插入片段大小為18kb,覆蓋度為69倍。利用分子標(biāo)記設(shè)計(jì)引物,對(duì)整個(gè)文庫(kù)進(jìn)行篩選,得到72個(gè)與水稻性狀相關(guān)的陽(yáng)性克隆基因,并進(jìn)行了測(cè)序驗(yàn)證,這些克隆將直接用于水稻遺傳改良。
[Abstract]:This research consists of two parts: the first part is about the construction of rape BAC library and the screening of related clones; the second part is about the construction of BIBAC subclone of rice BAC clone and the screening of related clone. Bacterial artificial chromosome (bacterial artificial chromosome,BAC library and artificial binary chromosome (binary bacterial artificial chromosome,BIBAC library play an important role in genome research. Rape is an important crop with good economic benefits. The vegetable oil extracted from rapeseed is not only low in saturated fatty acids but also contains a variety of amino acids and vitamins, which is very beneficial to human health. In this study, a rape BAC library was constructed by using the leaves of oilseed rape from Shijiaqin Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, which was used to screen and clone related genes. The rape BAC library was composed of 103680 clones and was stored in 270 384-well plates. The average inserted fragment size of the library was 122.6 kb. According to the rape genome 1000M, the rape genome was covered with 12.5 times of the rape genome, the no-load rate was less than 2 parts, and no organelle contamination was found. The whole rape BAC library was screened by linkage markers, and four positive clones were successfully screened, which carried genes related to rape traits. This part of the work has special significance for improving the yield and quality of rape through genetic improvement. BAC vector can not be used to transform plants directly. It needs the help of BIBAC vector and the subclone library constructed by BIBAC vector, which can directly transform plants. A rice BIBAC subclone library was constructed by partial digestion of the positive clones from rice BAC library by Sau3AI endonuclease. There are 768 clones in this library. The average insertion fragment size is 18 kb and the coverage is 69 times. The whole library was screened with primers designed by molecular markers and 72 positive genes related to rice traits were obtained and sequenced. These clones will be directly used in rice genetic improvement.
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S565.4;S511

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本文編號(hào)：2417957