【摘要】：脊尾白蝦是我國沿海重要的中小型經(jīng)濟(jì)蝦類之一,具有繁殖季節(jié)長、繁殖周期短等特點(diǎn)。每年的繁殖盛期為4-10月,已經(jīng)抱卵的雌蝦性腺仍然可以繼續(xù)發(fā)育,待幼體孵化后又可進(jìn)行第二次交尾抱卵,所以一尾雌蝦1年可以多次交尾繁殖。由于雌性脊尾白蝦無納精囊結(jié)構(gòu),所以每當(dāng)產(chǎn)卵前均需進(jìn)行交配。性腺成熟以前的蛻皮稱作生長蛻皮。當(dāng)雌蝦性腺成熟時(shí),先行蛻皮而后進(jìn)行交尾故此次蛻皮為生殖蛻皮。雌蝦的生長、性成熟交尾與蛻皮密切相關(guān),因此本研究對脊尾白蝦生長蛻皮與生殖蛻皮進(jìn)行了比較分析,探究兩者之間的區(qū)別及卵巢發(fā)育調(diào)控系統(tǒng)與蛻皮調(diào)控系統(tǒng)之間的關(guān)系,可以為蝦蟹類蛻皮機(jī)制的研究提供重要信息,還可以為雌蝦同步性成熟及人工繁育提供理論依據(jù)。其主要結(jié)果如下:1、脊尾白蝦不同蛻皮分期蛻皮激素濃度變化、幾丁質(zhì)酶、非特異性免疫酶活的比較分析本文對脊尾白蝦兩種蛻皮不同分期(間期C期、前期D期、后期AB期)的蛻皮激素(MH)濃度變化、幾丁質(zhì)酶(CHITINASE)及非特異性免疫指標(biāo)酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)的活性進(jìn)行了差異比較。結(jié)果顯示,生長蛻皮時(shí)各分期CHITINASE活力和MH激素濃度變化趨勢相同,呈逐漸升高趨勢,且各分期差異顯著(P0.05),生殖蛻皮時(shí)呈先降低后升高趨勢,且各分期差異顯著(P0.05);間期和前期生長蛻皮顯著低于生殖蛻皮(P0.05),后期時(shí)生長蛻皮顯著低于生殖蛻皮(P0.05)。生長蛻皮各分期PO活力差異不顯著,生殖蛻皮各分期PO活性呈先降低后升高趨勢,各分期差異顯著(P0.05);間期時(shí)生長蛻皮和生殖蛻皮PO活性差異不顯著,前期時(shí)生殖蛻皮顯著低于生長蛻皮(P0.05),后期時(shí)生殖蛻皮顯著高于生長蛻皮(P0.05)。生長蛻皮各分期SOD活性逐漸升高,且差異顯著(P0.05),生殖蛻皮時(shí)期后期SOD活性顯著低于間期和前期(P0.05),間期和前期差異不顯著;間期時(shí)生殖蛻皮顯著高于生長蛻皮(P0.05),前期兩者差異不顯著,后期時(shí)生殖蛻皮顯著低于生長蛻皮(P0.05)。生長蛻皮各分期AKP、ACP活力均呈先升高后降低趨勢,且各分期差異顯著(P0.05),生殖蛻皮與生長蛻皮變化趨勢相同;間期、前期、后期時(shí)生長蛻皮都顯著高于生殖蛻皮(P0.05)。綜合蛻皮激素、幾丁質(zhì)酶、免疫相關(guān)酶三項(xiàng)指標(biāo)的變化結(jié)果可知,生長蛻皮和生殖蛻皮因?yàn)槁殉驳陌l(fā)育而存在明顯不同,卵巢發(fā)育會導(dǎo)致蛻皮過程中機(jī)體免疫力顯著升高,而使蛻皮相關(guān)的幾丁質(zhì)酶和激素水平顯著降低。2、脊尾白蝦E75基因的克隆及其在不同蛻皮分期的表達(dá)分析通過RACE技術(shù)成功克隆了脊尾白蝦E75基因cDNA序列全長,命名為EcE75(GenBank登錄號:KY471317)。該基因全長3944bp,包括2520bp的開放閱讀框(ORF),450bp的5’非編碼區(qū)(5’UTR)和974 bp的3’非編碼區(qū)(3’UTR)。脊尾白蝦E75基因編碼一個(gè)由839個(gè)氨基酸組成的多肽,分子量為92.307kDa,理論等電點(diǎn)為7.48。EcE75蛋白包含一個(gè)ZnF_C4(位于第32到104個(gè)氨基酸之間)、一個(gè)HOLI(位于第207到366個(gè)氨基酸之間)及六個(gè)低組分復(fù)雜區(qū)域。E75基因有一個(gè)明顯的跨膜螺旋,跨膜方向?yàn)橛蓛?nèi)向外。脊尾白蝦E75基因在進(jìn)化上具有一定的保守性,與甲殼動物聚為一支,與三疣梭子蟹、黑背地蟹、凡納濱對蝦和中國對蝦親緣關(guān)系最近,同源性分別為79%、79%、78%、78%。EcE75基因在脊尾白蝦的13種組織中均有表達(dá),其中眼柄的表達(dá)量最高,卵巢次之。該基因在蛻皮各分期不同組織的表達(dá)可知,眼柄和鰓中的表達(dá)量一致,蛻皮前期表達(dá)量最高,蛻皮間期次之,蛻皮后期表達(dá)量最低。在大顎器中蛻皮間期表達(dá)量最高,推測可能與大顎器分泌的甲基法尼脂的調(diào)控作用有關(guān)。由此可知,E75基因在眼柄中表達(dá)量最高,在蛻皮前期大量表達(dá)說明該基因?qū)刮舶孜r的蛻皮具有重要的調(diào)控作用。3、四種蛻皮相關(guān)基因在脊尾白蝦不同蛻皮分期的表達(dá)分析通過RT-PCR技術(shù),研究了ECR、RXR、E75、FAMeT四種基因在生長蛻皮和生殖蛻皮不同分期的表達(dá)規(guī)律。結(jié)果顯示,RXR與ECR基因的表達(dá)規(guī)律基本一致。生殖蛻皮的蛻皮前期和后期表達(dá)量都比生長蛻皮高,可能是由于蛻皮激素對卵黃發(fā)生的刺激作用,而蛻皮激素的活性形式20E需要結(jié)合ECR和RXR形成的二聚體從而導(dǎo)致兩者表達(dá)量升高的原因。RXR在生殖蛻皮的蛻皮后期表達(dá)量高于蛻皮前期可能是由于卵巢發(fā)育的關(guān)系。E75基因在生殖蛻皮的表大規(guī)律與ECR一致,而生長蛻皮蛻皮前期表達(dá)量與蛻皮間期表達(dá)量差異不顯著與ECR和RXR的表達(dá)規(guī)律不一致原因未知,有待進(jìn)一步研究。FAMeT生殖蛻皮各分期的表達(dá)量顯著高于生長蛻皮各分期(P0.05),說明MF對生殖的調(diào)節(jié)作用大于生長。在生殖蛻皮前期大量表達(dá),充分證明了FAMeT是甲殼動物的促性腺激素,能促進(jìn)卵母細(xì)胞的發(fā)育。該研究結(jié)果表明,生殖蛻皮時(shí)ECR、RXR、E75、FAMeT都受到卵巢發(fā)育的影響表達(dá)量上調(diào)從而促進(jìn)卵巢發(fā)育和蛻皮的發(fā)生。
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【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2341824