【摘要】：近年來,關(guān)于木麻黃防護(hù)林的研究多集中于遺傳育種、凋落物降解、種苗造林以及化感作用等方面,而針對(duì)木麻黃根內(nèi)生真菌分離鑒定與群落結(jié)構(gòu)多樣性分析的研究仍鮮有報(bào)道。因此基于海南省木麻黃防護(hù)林的實(shí)際需求,本文選擇�？谑泄鹆盅蠛I木麻黃的幼齡林、中齡林以及成熟林作為實(shí)驗(yàn)樣地,運(yùn)用了高通量測(cè)序平臺(tái),通過不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌的豐度、群落組成及進(jìn)化關(guān)系的分析,各林齡木麻黃根內(nèi)生真菌群落的差異比較及動(dòng)態(tài)變化,揭示了木麻黃根內(nèi)生真菌的群落結(jié)構(gòu)多樣性;利用傳統(tǒng)經(jīng)典方法對(duì)不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌分離,并與Biolog微生物自動(dòng)分析系統(tǒng)相結(jié)合進(jìn)行菌種鑒定;通過GC-MS技術(shù)對(duì)分離出的不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌的發(fā)酵液進(jìn)行萃取和鑒定,并與實(shí)驗(yàn)組前期各林齡木麻黃土壤、根、凋落物浸提液鑒定出的物質(zhì)成分進(jìn)行比較;同時(shí)利用不同菌體發(fā)酵液對(duì)鄉(xiāng)土樹種肖槿和紅厚殼進(jìn)行處理,從而探究不同菌體發(fā)酵液對(duì)兩種鄉(xiāng)土樹種化感潛力的差異及影響。研究結(jié)果為揭示木麻黃根內(nèi)生真菌在化感效應(yīng)中的作用奠定了基礎(chǔ),并為進(jìn)一步探討木麻黃化感作用機(jī)制及途徑提供理論基礎(chǔ),同時(shí)也為海南省防護(hù)林的更新、建設(shè)提供了科學(xué)的理論指導(dǎo)。本文研究結(jié)果如下:1.基于Illumina Miseq高通量測(cè)序平臺(tái),共獲得不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌有效序列318972條,各林齡序列條數(shù)結(jié)果大小順序?yàn)?中齡林,幼齡林,成熟林。不同林齡聚類樹和柱狀圖組合分析表明幼齡林和中齡林聚為一類,表明在群落組成上木麻黃的幼齡林和中齡林更為相近,與成熟林存在差異。各林齡木麻黃根內(nèi)生真菌優(yōu)勢(shì)菌門為子囊菌門和擔(dān)子菌門。通過OTU豐度的PCA和PCoA分析表明:隨著木麻黃林齡的增長(zhǎng),不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌的結(jié)構(gòu)組成上出現(xiàn)了差異,其中林齡大小是導(dǎo)致各樣本離散的主要因素。2.利用傳統(tǒng)經(jīng)典法對(duì)不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌進(jìn)行分離,并用無菌水檢驗(yàn)法、組織印跡法驗(yàn)證無雜菌生長(zhǎng),基于Biolog微生物自動(dòng)分析系統(tǒng)鑒定出木麻黃根內(nèi)生真菌4株(青霉屬2株,曲霉屬2株)分別為棘孢曲霉、梅林青霉、新薩托菌屬和離生青霉,均屬于發(fā)菌科,為木麻黃根內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)菌科。3.GC-MS鑒定結(jié)果表明:不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物鑒定出的物質(zhì)主要為酯類、酚類、有機(jī)酸、酮類、醛類、醚類、醇類、吡啶類等多種有機(jī)化合物,表明各林齡木麻黃根內(nèi)生真菌發(fā)酵液鑒定出的物質(zhì)種類豐富且存在差異。并與不同林齡木麻黃土壤、根、凋落物浸提液鑒定出的物質(zhì)比較,存在共同產(chǎn)物為2,4-二叔丁基苯酚、1,2,3,4-丁四醇、藍(lán)桉醇;差異性產(chǎn)物分別為鄰苯三酚、月桂酸、棕櫚酸等。此外,利用甲醇萃取物質(zhì)比采用正己烷作為萃取劑鑒定出的物質(zhì)種類更豐富。4.不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌發(fā)酵液對(duì)肖槿、紅厚殼鄉(xiāng)土樹種種子的萌發(fā)過程均有不同程度的抑制,降低了兩種鄉(xiāng)土樹種種子的發(fā)芽率,并且肖槿、紅厚殼鄉(xiāng)土樹種種子的絕對(duì)發(fā)芽率、絕對(duì)發(fā)芽勢(shì)以及化感效應(yīng)指數(shù)等也均受到了抑制。在同種菌體發(fā)酵液處理下,均表現(xiàn)為鄉(xiāng)土樹種紅厚殼種子較肖槿種子對(duì)化感作用的耐受性更強(qiáng)。在不同菌體發(fā)酵液中,棘孢曲霉對(duì)肖槿和紅厚殼種子萌發(fā)過程和發(fā)芽指標(biāo)的影響最為明顯。表明菌體發(fā)酵液中的化感物質(zhì)種類及其含量是引起抑制作用的原因之一。總而言之,不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌表現(xiàn)出豐富的菌群多樣性。隨著林齡的變化菌群結(jié)構(gòu)出現(xiàn)了差異,與林齡大小、林地環(huán)境因子以及林地化感物質(zhì)積累等因素有關(guān)。此外,不同林齡木麻黃根內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物中存在部分具有化感潛力的物質(zhì),并且菌體發(fā)酵液對(duì)肖槿和紅厚殼兩種鄉(xiāng)土樹種種子產(chǎn)生不同程度的抑制作用,也表現(xiàn)出具有化感潛力,表明微生物次生代謝產(chǎn)物是化感物質(zhì)來源的一個(gè)重要方面。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：海南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S792.93

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2320081