發(fā)布時(shí)間：2018-09-07 10:45

【摘要】：昆蟲的先天免疫系統(tǒng)包括體液免疫和細(xì)胞免疫。由血細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)主要包括吞噬、結(jié)節(jié)和包囊作用,在抵御病原物感染中發(fā)揮重要作用。包囊作用專門清除那些體積太大而不能被單個(gè)血細(xì)胞吞噬的入侵者,在此過程中,昆蟲血細(xì)胞必須由非粘附性的狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)檎掣叫缘臓顟B(tài),進(jìn)而延展和包囊外來入侵者。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),棉鈴蟲的一種模式識(shí)別受體C型凝集素3 (C-type lectin 3,HaCTL3)能夠招募、并促進(jìn)血細(xì)胞對凝膠珠的包囊反應(yīng),然而HaCTL3在血細(xì)胞上的受體尚不清楚。有研究表明,整聯(lián)蛋白(β-integrin)在昆蟲血細(xì)胞延展和包囊過程中發(fā)揮重要作用,但分子機(jī)理尚不完全清楚。為了闡明棉鈴蟲Haβ-integrin的功能,并驗(yàn)證其是否在HaCTL3促進(jìn)血細(xì)胞包囊反應(yīng)過程發(fā)揮作用,我們從棉鈴蟲的轉(zhuǎn)錄組中獲取Hqβ-integrin的基因序列。通過原核表達(dá)、純化獲得Haβ-integrin重組蛋白。分析Haβ-integrin的表達(dá)模式,并進(jìn)行Haβ-integrin相關(guān)的功能實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明:1、Haβ-integrin在血細(xì)胞中高表達(dá),且主要定位在血細(xì)胞膜上;2、Haβ-integrin參與血細(xì)胞對凝膠珠的包囊;3、HaCTL3能夠結(jié)合到血細(xì)胞膜上,而敲降Haβ-integrin表達(dá)后,HaCTL3則不能結(jié)合到血細(xì)胞表面,暗示Haβ-integrin可能為HaCTL3的血細(xì)胞膜受體;免疫共沉淀證實(shí)Haβ-integrin和HaCTL3可以相互作用;4、敲降Haβ-integrin能夠抑制HaCTL3的促血細(xì)胞包囊作用。綜上,我們證實(shí)Haβ-integrin可能作為HaCTL3的血細(xì)胞膜受體,在介導(dǎo)HaCTL3促進(jìn)血細(xì)胞包囊過程中發(fā)揮重要作用。本研究將加深我們對昆蟲血細(xì)胞包囊反應(yīng)分子機(jī)理的理解,并為害蟲的生物防治提供新的線索。
[Abstract]:The innate immune system of insects includes humoral and cellular immunity. The immune response mediated by blood cells mainly includes phagocytosis, nodule and cysts, and plays an important role in resisting pathogen infection. The role of cysts is to eliminate intruders whose size is too large to be swallowed by a single blood cell. In this process, the blood cells of insects must change from non-adhesiveness to adhesiveness, and then extend and envelop alien invaders. Our previous study found that a pattern recognition receptor C type lectin 3 (C-type lectin 3H CTL 3) of Helicoverpa armigera can recruit and promote the cysts response of blood cells to gel beads, but the receptor of HaCTL3 on blood cells is not clear. Some studies have shown that 尾 -integrin plays an important role in the process of hemocyte expansion and cysts in insects, but the molecular mechanism is not completely clear. In order to elucidate the function of Ha 尾 -integrin in Helicoverpa armigera and verify whether it plays an important role in the process of promoting hemocyte cysts reaction by HaCTL3, we obtained the gene sequence of Hq 尾 -integrin from the transcription group of Helicoverpa armigera. Ha 尾 -integrin recombinant protein was purified by prokaryotic expression. The expression pattern of Ha 尾 -integrin was analyzed, and the functional experiments related to Ha 尾 -integrin were carried out. The results showed that the expression of 尾 -integrin was highly expressed in the blood cells, and it was mainly located on the membrane of the blood cells. 2Ha 尾 -integrin was involved in the binding of HaCTL3 to the hemocyte membrane, but HaCTL3 could not bind to the surface of the blood cells after the expression of Ha 尾 -integrin. It was suggested that Ha 尾 -integrin might be the plasma membrane receptor of HaCTL3, and that Ha 尾 -integrin and HaCTL3 could interact with each other by co-immunoprecipitation. Knockdown of Ha 尾 -integrin could inhibit the hematopoietic cysts of HaCTL3. In conclusion, we confirm that Ha 尾 -integrin may be the blood membrane receptor of HaCTL3, and play an important role in the process of promoting the cysts of blood cells mediated by HaCTL3. This study will deepen our understanding of the molecular mechanism of hemocyst reaction in insects and provide new clues for biological control of insect pests.
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S433

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本文編號(hào)：2228040