【摘要】：產(chǎn)氣莢膜梭菌是引起多種人畜共患病的條件致病菌,為了解內(nèi)蒙古地區(qū)牛、羊產(chǎn)氣莢膜梭菌的型的分布情況,根據(jù)GenBank上發(fā)表的產(chǎn)氣莢膜梭菌16S rRNA基因和編碼α、β、ε毒素的基因設(shè)計(jì)了 4對引物,建立建立產(chǎn)氣莢膜梭菌16SrRNA的PCR檢測方法和產(chǎn)氣莢膜梭菌α、β、ε毒素的多重PCR分型方法,并對采集的64份病料進(jìn)行分離、培養(yǎng)和生化鑒定,然后用上述建立的PCR方法對分離菌進(jìn)行檢測與分型。構(gòu)建產(chǎn)氣莢膜梭菌16S rRNA基因的重組質(zhì)粒,分析其與產(chǎn)氣莢膜梭菌參考菌株的同源性并構(gòu)建進(jìn)化樹。試驗(yàn)結(jié)果表明:建立的產(chǎn)氣莢膜梭菌16S rRNA PCR方法和產(chǎn)氣莢膜梭菌α、β、ε毒素的多重PCR分型方法均能擴(kuò)增出相應(yīng)的條帶,并且敏感性和特異性均比較高。對采集的64份病料中的細(xì)菌進(jìn)行分離、培養(yǎng),并經(jīng)革蘭氏染色鏡檢,生化鑒定后,有11株分離菌與國內(nèi)外報(bào)道的產(chǎn)氣莢膜梭菌的形態(tài)及生化特性一致。用上述兩種PCR方法對這11份分離菌進(jìn)行檢測,擴(kuò)增出的條帶大小與預(yù)期的一致,其中多重PCR結(jié)果顯示,這11株分離菌中有3株A型產(chǎn)氣莢膜梭菌,3株C型產(chǎn)氣莢膜梭菌,5株D型產(chǎn)氣莢膜梭菌。測序結(jié)果表明這11株產(chǎn)氣莢膜梭菌的16S rRNA和參考菌株的16S rRNA的同源性在98%以上。
[Abstract]:Clostridium perfringens is a conditional pathogen causing zoonosis. In order to understand the distribution of Clostridium perfringens in Inner Mongolia, Based on the 16s rRNA gene of Clostridium perfringens and the gene encoding 偽, 尾, 蔚 toxin published in GenBank, four pairs of primers were designed to establish the PCR detection method of Clostridium perfringens 16s rRNA and the multiplex PCR typing method of Clostridium perfringens 偽, 尾, 蔚 toxin. 64 samples were isolated, cultured and biochemically identified, and then the isolated bacteria were detected and typed by the PCR method. The recombinant plasmid of 16s rRNA gene of Clostridium perfringens was constructed and its homology with the reference strain of Clostridium perfringens was analyzed and an evolutionary tree was constructed. The results showed that the 16s rRNA PCR method of Clostridium perfringens and the multiplex PCR typing method of Clostridium perfringens 偽, 尾, 蔚 toxin could amplify the corresponding bands, and the sensitivity and specificity were high. The bacteria collected from 64 samples were isolated, cultured and identified by Gram staining. After biochemical identification, 11 isolates were found to be consistent with the morphological and biochemical characteristics of Clostridium perfringens reported at home and abroad. The two PCR methods were used to detect the 11 isolates. The amplified bands were in accordance with the expected size, and the multiplex PCR results showed that, Of the 11 isolates, 3 were Clostridium perfringens type A, 3 were Clostridium perfringens type C and 5 were Clostridium perfringens type D. The results of sequencing showed that the homology of 16s rRNA between the 11 strains of Clostridium perfringens and the reference strain was more than 98%.
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.61

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本文編號：2138966