本文選題：鰱 + 低氧脅迫��； 參考：《西南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：鰱(Hypophthalmichthys molitrix)是我國主要的淡水養(yǎng)殖魚類,年總產(chǎn)量居我國淡水養(yǎng)殖產(chǎn)量的第二位。在養(yǎng)殖和運(yùn)輸過程中容易遭受低氧脅迫,引起浮頭、窒息、泛塘等缺氧現(xiàn)象,極易造成死亡,導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失。因此,研究低氧對鰱機(jī)體的生理脅迫及其損傷機(jī)理,將為鰱生產(chǎn)和運(yùn)輸技術(shù)的改進(jìn)提供基礎(chǔ)資料,具有重要應(yīng)用價值。本研究將實(shí)驗(yàn)魚置于密閉水箱,通過魚體自發(fā)耗氧進(jìn)行低氧處理(H組),分別在低氧處理后2、6、10h(輕、中度低氧)和18h(嚴(yán)重低氧)時取樣。采用生理生化方法測定鰱血清生化指標(biāo)和組織氧化應(yīng)激指標(biāo),探討低氧對鰱心臟、腦、肝胰臟和腎臟的生理功能和組織損傷的影響。隨后,再次采取密封處理至鰱嚴(yán)重浮頭以后進(jìn)行復(fù)氧處理(R組),在恢復(fù)充氧0、1、2、4、8h時取樣,測定血清生化指標(biāo)和組織氧化應(yīng)激指標(biāo),分析鰱組織器官在復(fù)氧之后的健康狀況。由于Ca2+與細(xì)胞死亡密切相關(guān),能夠參與到細(xì)胞凋亡途徑中,與凋亡調(diào)控因子相互作用,調(diào)控細(xì)胞凋亡。本研究設(shè)置了急性嚴(yán)重低氧脅迫處理,進(jìn)一步研究低氧對鰱心肌細(xì)胞凋亡和鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的影響,檢測了心肌Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性變化;通過TUNEL法檢測了心肌細(xì)胞凋亡情況;并結(jié)合qPCR技術(shù)分析了凋亡相關(guān)基因bax、bcl-2 mRNA和鈣穩(wěn)態(tài)相關(guān)基因calm(鈣結(jié)合蛋白)、LETM1(亮氨酸拉鏈-EF-手型跨膜蛋白1)mRNA的表達(dá)變化。主要結(jié)果如下:(1)低氧與復(fù)氧對鰱血清生化指標(biāo)的影響。隨著低氧處理時間的延長,心肌酶CK和腎功能相關(guān)指標(biāo)UREA、UA逐漸升高,肝功能相關(guān)指標(biāo)ALT、AST、ALP和代謝相關(guān)指標(biāo)TP、TG、TC先呈下降趨勢再升高。復(fù)氧以后,ALT、AST、ALP、UREA、TP、TC逐漸升高,CK、UA逐漸下降。復(fù)氧8h時,CK、ALT、AST顯著高于NC組(常氧對照組),TG顯著低于NC組,其余指標(biāo)與NC組無顯著差異。溶解氧變化對TBIL、CREA、Cl-、Ca2+影響不顯著。(2)低氧與復(fù)氧對鰱心臟、腦、肝胰臟和腎臟氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響。(1)低氧處理后,鰱心臟SOD和MDA逐漸增多,CAT逐漸減少,H10組SOD、GSH、MDA均達(dá)到最高值;腦SOD和GSH顯著性上升再下降,MDA顯著下降,H18組CAT達(dá)到最高;肝胰臟SOD、CAT和MDA在2h時顯著升高,隨后SOD、CAT和GSH均降低再逐漸升高,MDA逐漸下降;腎臟SOD和CAT顯著升高,H18組雖有下降,仍然顯著高于H0組。(2)中度低氧后再復(fù)氧處理?xiàng)l件下,心臟SOD顯著下降,CAT顯著升高;腦SOD、CAT和GSH均表現(xiàn)出先降后升再降的趨勢,R4組所有指標(biāo)達(dá)最高值;肝胰臟SOD、CAT和GSH呈波動性變化,MDA逐漸升高;腎臟SOD和CAT顯著下降,GSH與MDA呈現(xiàn)顯著性波動性變化。復(fù)氧8h時,肝胰臟、腎臟及心臟和腦的其他氧化應(yīng)激指標(biāo)與NC組無顯著性差異,心臟CAT顯著低于NC組,MDA顯著高于NC組,腦CAT和MDA顯著低于NC組,GSH顯著高于NC組。(3)低氧誘導(dǎo)鰱心肌細(xì)胞凋亡。TUNEL組織形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果表明低氧會誘導(dǎo)鰱心肌細(xì)胞凋亡,凋亡細(xì)胞數(shù)隨著氧濃度的降低而增加,對照組細(xì)胞凋亡指數(shù)為7.69±2.96、浮頭組為47.94±1.87、死亡組為85.39±2.61,各組間差異極顯著(P0.01)。qPCR結(jié)果顯示心臟bax mRNA逐漸上調(diào),死亡組顯著高于對照組和浮頭組;bcl-2 mRNA逐漸下調(diào),死亡組和浮頭組顯著低于對照組。(4)低氧對鰱心肌細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的影響。在氧濃度下降過程中,Na+/K+-ATPase和Ca2+-ATPase酶活力先降低后升高,calm mRNA先下調(diào)再上調(diào),LETM1 mRNA逐漸升高,死亡組四個指標(biāo)均顯著高于浮頭組。結(jié)果表明,輕、中度低氧處理引起鰱心臟、腦、肝胰臟和腎臟部分生理功能障礙及氧化應(yīng)激反應(yīng);嚴(yán)重低氧脅迫可能會引起鰱組織器官不可逆損傷和強(qiáng)烈的氧化應(yīng)激反應(yīng),甚至導(dǎo)致死亡。缺氧后再復(fù)氧,肝臟和腎臟生理功能基本恢復(fù)正常,腦和心臟的部分氧化應(yīng)激指標(biāo)不能恢復(fù),提示缺氧對腦和心臟損傷更嚴(yán)重。鰱從缺氧浮頭到死亡的過程中,心肌細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)失衡,刺激機(jī)體通過升高Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性和上調(diào)calm、LETM1 mRNA的表達(dá),抵御細(xì)胞鈣超載和線粒體鈣超載的發(fā)生,同時心肌細(xì)胞促凋亡基因bax的表達(dá)上調(diào)和抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表達(dá)下調(diào),加速了心肌細(xì)胞凋亡進(jìn)程。結(jié)果提示,心肌細(xì)胞大量凋亡和心臟不可逆損傷可能是持續(xù)嚴(yán)重低氧導(dǎo)致鰱死亡的主要原因。
[Abstract]:In this study , the effects of hypoxia on the physiological function and tissue injury of silver carp ( Hypophthalmichrix molitrix ) were studied . The effects of hypoxia on the physiological function and tissue injury of silver carp were studied . Compared with NC group , SOD , CAT and GSH in liver were significantly higher than those in NC group , while SOD , CAT and GSH in liver were significantly higher than those in NC group . The results showed that the activity of Na + / K + - ATPase and Ca 2 + - ATPase was significantly higher than that in the control group and the death group was significantly higher than that of the control group .
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2102690