本文選題：豬戊型肝炎病毒 + P1蛋白��； 參考：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：戊型肝炎病毒(Hepatitis E,HEV)屬于戊型肝炎病毒科戊型肝炎病毒屬中的成員,是引起人類和動(dòng)物戊型肝炎病毒感染的病原體。近年研究發(fā)現(xiàn),戊型肝炎作為一種人畜共患病,在人-豬的流行與傳播中扮演重要角色,嚴(yán)重威脅著人類的健康,目前認(rèn)為人HE的流行與傳播主要是由豬戊型肝炎病毒引起的。有研究發(fā)現(xiàn)從豬體內(nèi)分離的HEV與當(dāng)?shù)厝朔蛛x出的HEV核苷酸序列同源性較高,與豬接觸的職業(yè)人群血清抗HEV抗體均高于非職業(yè)人群,表明HEV在人和豬種間傳播可能進(jìn)行跨種傳播。目前,HEV分為四種基因型,其中基因1型和2型主要感染人;基因3型和4型主要感染豬等家畜,同時(shí)也可以感染人和非人靈長類,豬感染HEV以基因3型為主。人HEV主要通過消化道感染,以青壯年感染率最高,孕婦感染病死率高達(dá)20%。豬感染HEV一般不出現(xiàn)臨床癥狀,常呈現(xiàn)隱性感染,但作為HEV的自然宿主,可能參與引起人類的戊型肝炎。近年來食源性戊型肝炎流行情況嚴(yán)重,已成為全球關(guān)注重要的公共衛(wèi)生問題,因此,掌握豬群HEV的感染情況,已成為保障人身安全的重要措施,對(duì)防控人戊型肝炎具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。目前有關(guān)本病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法有很多,如RT-PCR、ELISA、免疫印記、血清中和實(shí)驗(yàn)、免疫熒光顯微實(shí)驗(yàn)、免疫電鏡實(shí)驗(yàn)和免疫膠體金等技術(shù)。最常用的診斷方法是RT-PCR和ELISA方法。RT-PCR方法具有操作簡單、敏感性高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),但該方法易出現(xiàn)假陽性、所需檢測設(shè)備昂貴、僅限于實(shí)驗(yàn)室診斷、難以檢測大量臨床樣品。ELISA方法多用于檢測病毒感染產(chǎn)生的抗體,難以用于本病的早期、快速診斷。因此,迫切需要建立一種特異、敏感、快速與簡便用于HEV臨床診斷的實(shí)驗(yàn)室檢測方法。本研究應(yīng)用RT-PCR擴(kuò)增出編碼HEV病毒核衣殼P1蛋白的核苷酸序列,并將其克隆到原核表達(dá)載體p GEX-4T-1中,構(gòu)建出p GEX-4T-1-P1重組表達(dá)質(zhì)粒。應(yīng)用表達(dá)、純化的HEV P1蛋白,制備抗P1蛋白的單克隆抗體和多克隆抗體,并以此建立了檢測HEV病毒抗原的雙抗體夾心ELISA方法。試驗(yàn)結(jié)果顯示,建立的檢測HEV病毒抗原的雙抗體夾心ELISA方法特異、敏感、快速與簡便,可用于大規(guī)模HEV感染的流行病學(xué)調(diào)查。以建立的夾心ELISA方法對(duì)吉林與遼寧部分地區(qū)豬群感染HEV進(jìn)行了調(diào)查,發(fā)現(xiàn)所調(diào)查地區(qū)均存在著不同程度的HEV感染。該結(jié)果將為快速檢測HEV抗原提供有效方法,同時(shí)為揭示人類戊型肝炎發(fā)生與流行提供一定的理論依據(jù)。
[Abstract]:Hepatitis E virus (HEV) is a member of hepatitis E virus genus of hepatitis E virus family, and is the pathogen causing hepatitis E virus infection in humans and animals. In recent years, it has been found that hepatitis E, as a zoonotic disease, plays an important role in the epidemic and transmission of human and pig, and it is a serious threat to human health. At present, it is believed that the prevalence and transmission of human HE is mainly caused by porcine hepatitis E virus. It was found that the nucleotide sequence of HEV isolated from pigs was highly homologous to that of HEV isolated from local people, and the serum anti HEV antibodies of the occupational population in contact with pigs were higher than those of non-occupational population, indicating that the transmission of HEV between human and pig species might be interspecies transmission. At present, there are four genotypes of HEV, among which gene type 1 and type 2 mainly infect human, gene 3 and type 4 mainly infect domestic animals such as pigs, but also can infect human and non-human primates. The main type of HEV infection in pigs is gene 3. The infection rate of human HEV was the highest in young adults, and the mortality rate of pregnant women was as high as 20%. Porcine infection with HEV usually shows no clinical symptoms and often shows recessive infection, but as a natural host of HEV, it may be involved in the human hepatitis E. In recent years, the epidemic situation of foodborne hepatitis E has become an important public health issue of global concern. Therefore, mastering the situation of HEV infection in pigs has become an important measure to ensure personal safety. It has important public health significance for prevention and control of hepatitis E in human. At present, there are a lot of laboratory diagnostic methods for this disease, such as RT-PCRV ELISA, immune imprinting, serum neutralization, immunofluorescence microscopy, immunoelectron microscopy and immuno-colloidal gold. The most commonly used diagnostic methods are RT-PCR and ELISA methods. RT-PCR has the advantages of simple operation, high sensitivity and strong specificity. However, this method is prone to false positives, and the detection equipment required is expensive, which is limited to laboratory diagnosis. It is difficult to detect a large number of clinical samples. Elisa method is often used to detect antibodies produced by virus infection, and is difficult to be used in the early and rapid diagnosis of this disease. Therefore, there is an urgent need to establish a specific, sensitive, rapid and simple laboratory detection method for clinical diagnosis of HEV. In this study, the nucleotide sequence encoding the nucleocapsid P1 protein of HEV virus was amplified by RT-PCR and cloned into prokaryotic expression vector p GEX-4T-1 to construct the recombinant expression plasmid of p GEX-4T-1-P1. The monoclonal antibody and polyclonal antibody against P1 protein were prepared by using the expressed and purified HEV P1 protein, and a double antibody sandwich ELISA method for the detection of HEV virus antigen was established. The results showed that the double antibody sandwich ELISA method for detecting HEV virus antigen was specific, sensitive, rapid and simple, and could be used in the epidemiological investigation of large-scale HEV infection. A sandwich ELISA method was used to investigate the infection of HEV in swine populations in Jilin and Liaoning provinces. It was found that there were different degrees of HEV infection in all the areas investigated. The results will provide an effective method for rapid detection of HEV antigens and provide a theoretical basis for revealing the occurrence and prevalence of human hepatitis E.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：1969107