本文選題：關(guān)中黑豬精液 + ε-聚賴氨酸��； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：近年來由于抗生素不合理使用,致使部分細菌對常規(guī)抗生素產(chǎn)生耐藥性。若繼續(xù)在稀釋液中使用常規(guī)抗生素,可能致使耐藥細菌通過精液感染母豬。為減少抗生素的使用,降低細菌耐藥性的產(chǎn)生和提供更高生物安全的關(guān)中黑豬精液用于深部輸精,本研究在稀釋液中添加一種具有廣譜抑菌能力的天然的陽離子抗菌肽——ε-聚賴氨酸用于精液常溫保存。首先,本試驗采用高通量測序法檢測了不同時間段精液中細菌的種類,并通過16SrDNA法鑒定了公豬精液中分離的部分細菌的菌屬;其次,選擇精液中常見的細菌作為體外抑菌試驗菌種,測定ε-聚賴氨酸對其最小抑菌濃度;最后,探究了不同濃度ε-聚賴氨酸和0.16 g/Lε-聚賴氨酸替代部分慶大霉素對精液常溫保存效果的影響。本研究獲得的主要結(jié)果如下:1.常溫保存第1天精液中的細菌主要為革蘭氏陽性菌,如表皮葡萄球菌、地衣芽孢桿菌和淺綠氣球菌,常溫保存第5天主要為革蘭氏陰性菌,如魯菲不動桿菌、木糖氧化無色桿菌和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌。2.ε-聚賴氨酸對魯菲不動桿菌,表皮葡萄球菌、淺綠氣球菌和大腸桿菌均有抑制效果;表皮葡萄球菌和大腸桿菌的最小抑菌濃度為0.02 g/L,魯菲不動桿菌和淺綠氣球菌最小抑菌濃度為0.04 g/L,而ε-聚賴氨酸對木糖氧化無色桿菌和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的抑制效果不佳。僅添加50%和25%標(biāo)準添加量的慶大霉素(0.25 g/L)均對木糖氧化無色桿菌和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的抑制效果不佳;而0.16 g/Lε-聚賴氨酸可分別替代50%和75%標(biāo)準添加量的慶大霉素,取得與標(biāo)準添加量慶大霉素相近的抑菌效果(P0.05)。3.在稀釋精液中添加0.04~0.64 g/L的ε-聚賴氨酸不影響其滲透壓(P0.05),當(dāng)添加1.28 g/Lε-聚賴氨酸時顯著提高其滲透壓(P0.05),0.04~1.28 g/Lε-聚賴氨酸均能有效抑制精液中細菌的生長和提高精液的常溫保存效果;其中0.16 g/Lε-聚賴氨酸常溫保存效果最佳(P0.05)。4.進一步研究發(fā)現(xiàn)稀釋液中,ε-聚賴氨酸與慶大霉素具有協(xié)同抑菌的作用;0.16 g/Lε-聚賴氨酸可分別替代50%和75%標(biāo)準添加量的慶大霉素,并取得與標(biāo)準添加量慶大霉素相近的抑菌效果和精液常溫保存效果(P0.05)。綜上所述,關(guān)中黑豬精液中的革蘭氏陰性菌為優(yōu)勢菌群,0.04 g/Lε-聚賴氨酸有效抑制表皮葡萄球菌,大腸桿菌、魯菲不動桿菌、淺綠氣球菌的生長;僅添加ε-聚賴氨酸對木糖氧化無色桿菌和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌抑制效果不佳,進一步研究發(fā)現(xiàn)0.16 g/Lε-聚賴氨酸可替代部分慶大霉素用于抑制這兩種細菌生長;0.04 g/L~1.28 g/Lε-聚賴氨酸均能提高精液的保存效果,其中其最適添加量為0.16 g/L;進一步研究發(fā)現(xiàn)ε-聚賴氨酸與慶大霉素在稀釋液中具有協(xié)同抑菌的作用。
[Abstract]:In recent years, some bacteria have become resistant to conventional antibiotics due to irrational use of antibiotics. Continued use of conventional antibiotics in diluents may cause drug-resistant bacteria to infect sows through semen. In order to reduce the use of antibiotics, reduce the production of bacterial resistance and provide higher biosafety of Guanzhong black pig semen for deep insemination, In this study, a natural cationic antimicrobial peptide-蔚-Polysine was added to the diluent to preserve semen at room temperature. Firstly, high throughput sequencing method was used to detect the species of bacteria in semen of different periods, and the genus of some bacteria isolated from boar semen was identified by 16SrDNA method. The common bacteria in semen were selected as bacteriostasis test strains in vitro, and the minimal inhibitory concentration of 蔚 -polylysine on them was determined. The effects of different concentrations of 蔚 -polylysine and 0.16 g / L 蔚 -poly-lysine on the preservation of semen at room temperature were investigated. The main results of this study are as follows: 1. On the first day of cryopreservation, the bacteria in semen were mainly Gram-positive bacteria, such as Staphylococcus epidermidis, Bacillus licheniformis and Balloon palliformis, and Gram-negative bacteria, such as Acinetobacter Ruffiensis, were mainly found in semen on the 5th day of preservation at room temperature. Acinetobacter lufii, Staphylococcus epidermidis, Balloonus graminis and Escherichia coli were all inhibited by Xyloxide and Maltobacillus maltophilia. The minimum inhibitory concentration of Staphylococcus epidermidis and Escherichia coli was 0.02 g / L, the minimum inhibitory concentration of Acinetobacter Ruffiensis and Anoacter palliforme was 0.04 g / L, while 蔚 -Polylysine was not good in inhibiting xylose oxidized and maltophilia. Only 50% and 25% standard addition of gentamicin 0.25 g / L) could not inhibit Xymoxanthobacterium and Maltophotrophomonas maltophilia, while 0.16 g / L 蔚 -Polysine could replace 50% and 75% standard addition of gentamicin, respectively. The antimicrobial effect of gentamicin was similar to that of the standard dosage of gentamicin. Adding 0.04 ~ 0.64 g / L 蔚 -polylysine to diluted semen did not affect the osmotic pressure (P _ (0.05). When 1.28 g / L 蔚 -polylysine was added, the osmotic pressure was significantly increased (P _ (0.05) P _ (0.04) and 1.28 g / L ~ (-) -polylysine could effectively inhibit the growth of bacteria in semen and improve the cryopreservation effect of semen at room temperature. Among them, 0.16 g / L 蔚 -Poly (lysine) was best preserved at room temperature (P0.05N. 4). Further study showed that 蔚 -polylysine and gentamicin had synergistic bacteriostasis effect in dilution solution, 0.16 g / L 蔚 -poly-lysine could replace 50% and 75% standard addition of gentamicin, respectively. The bacteriostatic effect of gentamicin was similar to that of standard dosage and the effect of semen preservation at room temperature was obtained (P 0.05). In conclusion, Gram-negative bacteria in the semen of Guanzhong Black Pig were the dominant bacteria group (0.04 g / L 蔚 -Polysine) which could effectively inhibit the growth of Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Acinetobacter lufi and Balloonus palliforme. The inhibitory effect of 蔚 -polylysine only on Xyloxide and Maltophostomonas maltophilia was not good. It was found that 0.16 g / L 蔚 -polylysine could be used to inhibit the growth of these two bacteria by 0.04 g/L~1.28 / L 蔚 -Polysine instead of gentamicin. The optimum addition amount was 0.16 g / L, and it was found that 蔚 -polylysine and gentamicin had synergistic bacteriostatic effect in the diluent.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S828

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本文編號：1913038