本文選題：雙峰駝CYP1A酶 + 特異性探針底物　； 參考：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：雙峰駝是生活在荒漠、半荒漠草原的特有家畜,具有很高的雜食性。喜歡采食鹽堿含量高的植物,在極端惡劣的生存環(huán)境中又可采食蛋白含量極少、富含纖維素的植物。雙峰駝這些獨(dú)特的采食特性暗示著其物質(zhì)代謝途徑的特殊性和處置外源性物質(zhì)能力的獨(dú)特性。而后者又與雙峰駝CYPs酶系息息相關(guān),因?yàn)镃YP酶系參與機(jī)體大多數(shù)內(nèi)源性和外源性物質(zhì)代謝。其中,CYP1A酶是CYP酶家族中的一個(gè)主要亞家族,在一些致癌物和毒性物質(zhì)的體內(nèi)活化與降解代謝過程中起著重要作用,并參與多種藥物的代謝,其活性與藥物的毒性、療效有著密切的關(guān)系。為探明CYP1A酶的體內(nèi)活性及其外源性藥物代謝的影響,開展了本項(xiàng)研究。首先將試驗(yàn)雙峰駝(n=12)分為底物組和酶抑制劑+底物組,每組6峰,底物組經(jīng)頸部肌肉注射探針底物對(duì)乙酰氨基酚注射液(4mg/kg),酶抑制劑+底物組雙峰駝按0.4mg/kg劑量肌肉注射洛美沙星注射液連續(xù)4天,于末次給藥后再注射相同劑量的對(duì)乙酰氨基酚注射液(4mg/kg),并于不同時(shí)間點(diǎn)采集血樣,分離血漿備用。其次,為研究雙峰駝CYP1A酶的體內(nèi)活性,使用反向高效液相色譜紫外檢測(cè)法檢測(cè)該酶的特異性探針底物--對(duì)乙酰氨基酚在雙峰駝血漿中的動(dòng)態(tài)濃度。采用內(nèi)標(biāo)法定量分析,內(nèi)標(biāo)物為間乙酰氨基酚,流動(dòng)相為甲醇/水=20/80,流速為0.5 mL·min-1,紫外檢測(cè)波長為248nm,柱溫為30℃,進(jìn)樣量為8uL。采用甲醇直接沉淀蛋白后用氮?dú)獯蹈煞椒ㄌ幚黼p峰駝血漿樣品,進(jìn)樣檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)血漿樣品藥物濃度。結(jié)果表明,底物對(duì)乙酰氨基酚和內(nèi)標(biāo)間乙酰氨基酚的的保留時(shí)間分別為6.Omin和8.2min,分離良好,無血漿雜峰干擾;且在0.08～10.24μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.9997,n=8);日內(nèi)和日間精密度RSD均小于7.0%;絕對(duì)回收率為80.00%～93.00%;相對(duì)回收率為94.00%～103.00%。采用Phoenix WinNonLin 7.0藥動(dòng)學(xué)軟件處理各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的血漿藥物濃度值,計(jì)算相關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。底物組藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別是:消除半衰期(T1/2)為5.59±0.17h,達(dá)峰時(shí)間(Tmax)為1.70±0.51h,達(dá)峰濃度(Cmax)為0.96±0.43μg/mL,藥時(shí)曲線下面積(AUC0-t)為 5.83土0.31μg· h/mL,表觀分布容積(Vd)為 4416.81±138.23mL/kg,清除率(CL)為593.04±28.41mL/(kg·h),體內(nèi)平均滯留時(shí)間(MRT)為6.37±0.56h。酶抑制劑+底物組的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別是:T1/2為6.24土0.25h,Tmax為 0.833±0.37h,Cmax為1.22±0.66μg/mL,AUC0-t為8.88±0.23μg·h/mL,Vd為3934±90.03 mL/kg,CL為 437.05± 12.63 mL(kg · h),MRT 為 6.98±0.63h。采用Graphpad Prism 5.0軟件比較分析兩組雙峰駝藥動(dòng)學(xué)參數(shù),結(jié)果可知,CYP1A酶特異性探針底物對(duì)乙酰氨基酚在雙峰駝體內(nèi)的吸收快,消除相對(duì)較慢;洛美沙星可明顯抑制CYP1A酶活性,從而明顯延長對(duì)乙酰氨基酚在雙峰駝體內(nèi)的T1/2、提高Cmax、增加AUC和延長MRT,縮短Tmax。因此,通過本試驗(yàn)成功建立了測(cè)定雙峰駝CYP1A酶特異性探針底物--對(duì)乙酰氨基酚的RP—HPLC紫外檢測(cè)方法,闡明了雙峰駝CYP1A酶體內(nèi)活性及其特異性抑制劑的影響,研究結(jié)果為全面揭示雙峰駝CYP酶系的體內(nèi)外活性研究奠定了基礎(chǔ),提供了科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:In order to study the activity of CYP1A enzyme and its influence on the metabolism of exogenous substances , it was found that CYP1A enzyme is one of the main subfamily of CYP enzyme family , and its activity is closely related to the metabolism of exogenous substances . The results show that the retention time of the substrate acetaminophen and the internal standard is 6.Omin and 8.2 min , and the linear relationship is good ( R2 = 0.9997 , n = 8 ) . The pharmacokinetic parameters of CYP1A enzyme - specific probe substrate - acetaminophen in Bactrian camel were determined by using Graphpad Prism 5.0 software .

【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S824

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1841087