本文選題：中華絨螯蟹 + 鹽度��； 參考：《上海海洋大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)是國(guó)內(nèi)一種重要的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖種類。中華絨螯蟹的生殖洄游與生長(zhǎng)洄游兩個(gè)重要階段都涉及到鹽度變化,鹽度變化會(huì)使其滲透壓發(fā)生改變,而滲透壓調(diào)節(jié)一直以來是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)問題。本文采用營(yíng)養(yǎng)學(xué)、分子生物學(xué)、生物信息學(xué)等研究手段,對(duì)中華絨螯蟹在不同鹽度條件下基因表達(dá)的穩(wěn)定性、營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行了分析以及對(duì)鰓的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了研究,探討中華絨螯蟹滲透壓調(diào)節(jié)分子機(jī)制與營(yíng)養(yǎng)成分變化,結(jié)果如下。一、不同鹽度條件下中華絨螯蟹相關(guān)基因表達(dá)穩(wěn)定性的研究為探討中華絨螯蟹滲透壓調(diào)節(jié)過程中相關(guān)基因的表達(dá)情況,了解洄游類水生生物滲透壓調(diào)節(jié)的分子基礎(chǔ),本文進(jìn)行了中華絨螯蟹在四個(gè)不同鹽度梯度下(0、10、20、30)的脅迫試驗(yàn),觀察了4個(gè)能量代謝相關(guān)基因:液泡ATP合成酶亞基B(vacuolar ATPsynthase subunit B,VATB)、泛素結(jié)合酶(ubiquitin-conjugatingenzyme E2b,UBE)、精氨酸激酶(arginine kinase,AK)、甘油醛-3-磷酸脫氫(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH);3個(gè)生長(zhǎng)相關(guān)基因:泛素"核糖體S27融合蛋白(ubiquitin/ribosomalS27fusionprotein,S27)、β-肌動(dòng)蛋白(beta-actin,β-ACTIN)、α-微管蛋白(alpha-tubulin,α-TUB);2個(gè)應(yīng)激性相關(guān)基因:熱休克蛋白90(heat shock protein90,HSP90)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移(glutathioneS-transferase,GST);一個(gè)滲透壓調(diào)節(jié)相關(guān)基因:鈉-鉀ATP酶α亞基(sodium-potassiumATPase alpha subunit,NAK),共10個(gè)基因的表達(dá)穩(wěn)定性。結(jié)果表明3個(gè)能量代謝相關(guān)基因(VATB、UBE、GAPDH)、1個(gè)應(yīng)激性相關(guān)基因(GST)和滲透壓調(diào)節(jié)相關(guān)基因(NAK)在不同鹽度梯度間的表達(dá)量存在顯著差異(P0.05),而其他基因的表達(dá)量不存在顯著差異(P0.05)。應(yīng)用BestKeeper、NormFinder、Ge Norm三個(gè)軟件進(jìn)行各基因的表達(dá)穩(wěn)定性分析表明,應(yīng)激性相關(guān)基因(GST)和滲透壓調(diào)節(jié)相關(guān)基因(NAK)對(duì)鹽度變化的響應(yīng)程度較高,表達(dá)不穩(wěn)定;2個(gè)生長(zhǎng)相關(guān)基因(α-TUB、S27)對(duì)鹽度變化的響應(yīng)程度低,表達(dá)穩(wěn)定,可以作為不同鹽度處理下基因表達(dá)的內(nèi)參基因。本研究結(jié)果為研究中華絨螯蟹不同類別基因的表達(dá)穩(wěn)定性提供了依據(jù),為篩選鹽度等環(huán)境變化條件下的內(nèi)參基因提供參考依據(jù)。二、鹽度對(duì)中華絨螯蟹營(yíng)養(yǎng)成分的影響為探討鹽度對(duì)中華絨螯蟹營(yíng)養(yǎng)成分的影響,本章在兩個(gè)不同鹽度條件下(0、20)比較了中華絨螯蟹肌肉和肝胰腺組織中脂肪酸與氨基酸的組成。結(jié)果表明,0鹽度條件下的中華絨螯蟹肌肉的單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸含量均極顯著高于20鹽度(P0.01),鹽度刺激會(huì)降低肌肉組織中不飽和脂肪酸的含量。不同鹽度條件下的肝胰腺的脂肪酸含量差異不顯著(P0.05),鹽度刺激對(duì)肝胰腺中脂肪酸含量的影響較少。鹽度刺激對(duì)肌肉組織中氨基酸的影響主要體現(xiàn)在必需氨基酸,而對(duì)非必需氨基酸影響較低,20鹽度下的必需氨基酸含量顯著高于(P0.05)0鹽度。在肝胰腺氨基酸中,鹽度刺激對(duì)雌蟹影響較少,而雄蟹,在20鹽度條件下的必需氨基酸與非必需氨基酸均顯著高于(P0.05)0鹽度,說明鹽度刺激對(duì)雄蟹氨基酸的影響較大。鹽度刺激對(duì)肝胰腺和肌肉組織中氨基酸和脂肪酸的影響,說明鹽度刺激能影響中華絨螯蟹的營(yíng)養(yǎng)成分。三、不同鹽度條件下中華絨螯蟹鰓的轉(zhuǎn)錄組分析中華絨螯蟹是一種洄游性經(jīng)濟(jì)蟹類,其一生有兩次洄游,即生長(zhǎng)洄游(溯河洄游,鹽度0左右)和生殖洄游(降河洄游,鹽度20左右)。本文在不同鹽度條件下(0、20、0)模擬這2個(gè)洄游過程,然后利用Illumina HiseqTM 4000測(cè)序技術(shù)對(duì)上述鹽度條件下的中華絨螯蟹鰓組織進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行分析。結(jié)果共獲得高質(zhì)量的序列92,612,226 bp條,約40Gb的測(cè)序數(shù)據(jù)。將獲得的序列通過De novo拼接,共獲得70,214個(gè)轉(zhuǎn)錄本,其中NCBI-NR數(shù)據(jù)庫(kù)注釋到42,188個(gè)轉(zhuǎn)錄本。通過基因差異表達(dá)分析,在不同鹽度條件下共鑒定出783個(gè)差異表達(dá)的基因,其中在鹽度條件為0條件下鑒定出91個(gè)高表達(dá)的基因;而在鹽度20條件下鑒定了93個(gè)高表達(dá)基因;鹽度再會(huì)0條件下鑒定62個(gè)高表達(dá)基因。在差異表達(dá)的基因中,sodium potassium-transporting atpase subunit beta-2基因參與滲透壓調(diào)節(jié)過程,維持細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境;heat shock protein 67b2基因使中華絨螯蟹適應(yīng)鹽度的變化,nadh dehydrogenase基因提供調(diào)節(jié)滲透壓調(diào)節(jié)所需的能量。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行不同鹽度條件下中華絨螯蟹鰓的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)研究,對(duì)中華絨螯蟹滲透壓調(diào)節(jié)的分子機(jī)制研究提供參考。
[Abstract]:涓崕緇掕灟锜，

本文編號(hào)：1818299