本文選題：茴香霉素 + MPF　； 參考：《延邊大學》2017年碩士論文

【摘要】：孤雌激活與體細胞核移植在動物育種、生產轉基因動物、建立動物模型、保護珍稀瀕危動物、提供人造器官異種移植研究以及發(fā)育生物學的研究等方面有著重要的作用與意義。而卵母細胞激活是影響孤雌激活和體細胞核移植效率的重要因素之一。同時也是確定孤雌激活和核移植以及隨后的克隆胚胎的發(fā)育的基本要素之一。因此,如何有效提高卵母細胞激活效率具有十分重要的意義。而茴香霉素是一種蛋白合成抑制劑,首次在牛孤雌激活胚胎和體細胞核移植激活處理上應用,發(fā)現能夠顯著提高牛的孤雌激活胚胎和體細胞核移植胚胎囊胚率并提高囊胚質量。但茴香霉素應用在豬的孤雌激活胚胎和體細胞核移植胚胎尚未見報道。所以在本研究中,我們利用蛋白質合成抑制劑茴香霉素在電激活后處理豬的孤雌激活胚胎和體細胞核移植胚胎來觀察實驗效果。我們獲得以下試驗結果:1.茴香霉素,CB組與未處理組對比胚胎排出第二極體。實驗發(fā)現茴香霉素和未處理組與CB組相比在排出第二極體上差異顯著。(51.9%and 51.6%vs.14.3%p0.05),結果說明茴香霉素不能抑制第二極體的排出。2.茴香霉素在1μg/mL與其他各個濃度下的胚胎發(fā)育到2-4細胞階段有顯著差異(table3-2)。通過Hoechest 33342染色的方法觀察茴香霉素處理組與對照組(CB)在囊胚的細胞數上沒有著顯著性差異(table2),0.01 μg/mL,0.1 μg/mL藥物濃度與1 μg/mL及對照組在達到囊胚的效率上有顯著地差異(31.8%and 27.1%vs.0 and 16.7%,p0.05)。在最佳濃度下的茴香霉素處理不同的時間下觀察胚胎發(fā)育能力。分別測量了 Oh,2h,4h,6h,下胚胎的發(fā)育能力,結果顯示:茴香霉素是在處理2,4,6h下孤雌激活胚胎有最好的發(fā)育能力(39.5%,33.3%and29.2%vs.20.3%,p0.05)。同樣,在胚胎發(fā)育到 2-4 細胞時期,以及囊胚平均細胞數上都沒有顯著差異。以上結果表明:茴香霉素的最佳處理條件為0.01 μg/mL下作用2h。3.6-DMAP,茴香霉素與未處理組對孤雌激活胚胎的影響,茴香霉素處理組和6-DMAP處理組與未處理組相比,在2-4細胞時期和囊胚平均細胞數上并無顯著性差異,在胚胎發(fā)育情況上,茴香霉素處理組和6-DMAP處理組與未處理組相比,能夠顯著提高孤雌激活胚胎發(fā)育能力(37.6%and 30.0%vs 19.9%,p0.05)。4.孤雌激活胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下測量MPF活性,結果顯示茴香霉素處理下的孤雌生殖胚胎MPF水平明顯低于對照組(361.3 pg/ml vs 254.2 pg/mL,p0.05)。5.在染色體我們對激活7天左右的分別來自茴香霉素處理組,6-DMAP處理組和對照組(CB)處理的早期囊胚進行核型分析。結果顯示茴香霉素與6-DMAP處理組和對照(CB)差異顯著(33.3%vs60%and 50%,p0.05)以上結果表明:在茴香霉素處理下可以降低囊胚染色體異常比例。6.PA胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下通過RT-PCR檢測多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax),實驗結果表明茴香霉素對PA囊胚的多能性基因和凋亡基因并無顯著性影響。7.6-DMAP,茴香霉素與未處理組對SCNT胚胎的影響,茴香霉素處理組和6-DMAP處理組與未處理組相比,在2-4細胞時期和囊胚平均細胞數上并無顯著性差異,在胚胎發(fā)育情況上,茴香霉素處理組與未處理組相比,能夠顯著提高SCNT胚胎發(fā)育能力(18.3%vs 4.2%p0.05)。結論:1)茴香霉素能夠通過改變MPF活性來影響孤雌激活胚胎和體細胞核移植胚胎的發(fā)育能力。2)茴香霉素能夠顯著降低孤雌激活囊胚染色體異常比例。3)茴香霉素對孤雌激活囊胚的多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax)并無顯著影響。其中,茴香霉素處理的最佳條件為0.01 μg/mL,2h。
[Abstract]:In this study , we found that there was no significant difference ( 51.9 % and 51.6 % vs.14 . 3 % p . 05 ) . The results showed that there was no significant difference between the treatment group and the untreated group . The results showed that there was no significant difference between the treatment group and the untreated group . The results showed that there was no significant difference between the treatment group and the untreated group . Conclusion : 1 ) The development of embryo and somatic cell nuclear transfer embryos can be influenced by the change of MPF activity .

【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S828
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本文編號：1817252