本文選題：蛋白轉導域 + 神經壞死病毒　； 參考：《中山大學》2017年碩士論文

【摘要】：病毒性神經壞死病(Viral nervous necrosis,VNN)是一種嚴重危害海水魚類養(yǎng)殖的疾病,主要感染魚類仔魚期和稚魚期,魚類一旦受到感染,就會造成80%-100%的死亡率,進而給魚類養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經濟損失。病毒性神經壞死病的病原體是神經壞死病毒(nervous necrosis virus,NNV),是一類二十面體,非囊膜包被的RNA病毒。目前對于VNN的免疫治療主要是通過疫苗免疫,如重組蛋白,DNA疫苗等,或通過抗NNV生物大分子,例如siRNA,抗病毒多肽等。但是藥物的治療效果往往受到藥物運輸?shù)挠绊憰蟠蛘劭?尤其是體內導入時細胞膜等屏障的阻隔。因此如何在保證藥物有效濃度的情況下,使這些生物大分子藥物能夠穿透細胞膜屏障,精確地到達靶標部位,發(fā)揮其治療作用,是一個值得深入研究的課題。本實驗室在斜帶石斑魚神經壞死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)的衣殼蛋白(capsid protein,CP)所形成的類病毒粒子(virus-like particle,VLP)基礎上,發(fā)現(xiàn)了位于OGNNV-CP的N端其中14個氨基酸的序列具有蛋白轉導域功能(protein transduction domain,PTD),并命名為NNV-PTD。將NNV-PTD與蛋白融合表達,發(fā)現(xiàn)它可以將融合蛋白轉運進亞洲海鱸胚胎全細胞(Asian sea bass,SB)。本文通過將NNV-PTD刪除或者轉移到CP的C末端,發(fā)現(xiàn)NNV-PTD對于OGNNV-VLP立體結構的形成不具有決定性的作用,CP仍然可以形成顆粒結構,并且可以進入SB細胞。進一步對NNV-PTD的細胞導入機制研究發(fā)現(xiàn),NNV-PTD是通過內吞途徑進入細胞,因為在4℃時,NNV-PTD不能轉運進SB細胞。通過化學抑制劑實驗,證實了NNV-PTD是通過網格蛋白介導的內吞途徑進入SB細胞,并且依賴于細胞骨架、pH值、發(fā)動蛋白、脂質和膽固醇等因素。同時,NNV-PTD也通過巨胞飲途徑進入SB細胞,且該途徑中巨胞飲體的形成是肌球蛋白Ⅱ依賴性的。這一點與VLP僅依賴于網格蛋白介導內吞途徑而與巨胞飲途徑無關的方式入侵SB細胞是有差別的。通過細胞篩選實驗我們發(fā)現(xiàn),NNV-PTD可以進入多種細胞系,包括昆蟲細胞S2和SF9,魚類細胞GB、SSN-1和MFF-1,哺乳類細胞Hela。說明了NNV-PTD的適用性很廣泛,作為一種新的蛋白轉導域具有很大的潛力,可以為抗病毒生物大分子類藥物穿越細胞膜屏障,達到靶標部位,發(fā)揮治療作用提供可能。本研究闡述了NNV-PTD的入侵機制和依賴因素,不僅為其導入應用提供理論依據,而且為VNN的預防和治療提供了新的思路和應用。
[Abstract]:Viral - like particle ( NNV ) is a kind of viral - like particle ( NNV ) , which is a kind of virus - like particle ( NNV ) . It was found that NNV - pD can enter SB cells through endocytosis , and it can be used as a new protein transduction domain . It is suggested that NNV - pis a new protein transduction domain , and it can be used as a new protein transduction domain .

【學位授予單位】：中山大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S941.4

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

1 范真真;陳虹;黃秉仁;;細胞內吞的研究進展[J];生命的化學;2014年04期

2 ;細胞內吞作用的研究進展(英文)[J];Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2009年06期

3 陳信忠;龔艷清;;魚類病毒性神經壞死病研究進展[J];生物技術通報;2006年S1期

4 秦綠葉;劉爽;汪沉然;王均輝;岳鑫;于常海;;巨胞飲的機制及功能的研究進展[J];生理科學進展;2006年01期

5 杜長征,張志文;受體介導式入胞的分子機理(1)[J];生物學通報;2004年11期

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本文編號：1760637