發(fā)布時間：2018-04-14 23:18

  本文選題：班氏跳小蜂 + 寄主定位　； 參考：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：嗅覺在寄生蜂寄主定位過程中發(fā)揮著非常重要的作用。寄生蜂可利用嗅覺感器接收來自植物或寄主的信息化學(xué)物質(zhì)作為其寄主定位的線索,探索寄生蜂的嗅覺系統(tǒng)及其寄主定位的嗅覺機制,將為害蟲的生物防治提供新思路。扶桑綿粉蚧(Phenacoccus solenopsis Tinsley)是我國嚴重的入侵性害蟲,班氏跳小蜂(Aenasius bambawalei Hayat)是其專性寄生天敵,對扶桑綿粉蚧具有較高的防控潛能。信息化學(xué)物質(zhì)在寄生蜂寄主定位過程中起著重要的作用,如果能夠探明班氏跳小蜂寄主定位的嗅覺機制,將可為扶桑綿粉蚧的生物防治提供理論基礎(chǔ)。為此,本課題以班氏跳小蜂為研究對象,在構(gòu)建分析其觸角轉(zhuǎn)錄組的基礎(chǔ)上,篩選鑒定了與嗅覺相關(guān)的功能基因;明確了部分氣味結(jié)合蛋白在班氏跳小蜂成蟲不同部位的表達模式;測定了氣味結(jié)合蛋白(Abam OBP1)與棉花揮發(fā)物的結(jié)合特性,從中篩選出具有較強結(jié)合活性的物質(zhì),并測定了班氏跳小蜂對這些物質(zhì)的行為反應(yīng)。主要結(jié)果如下:1班氏跳小蜂的觸角轉(zhuǎn)錄組分析通過高通量測序技術(shù)(Illumina Hiseq 2000)分析,班氏跳小蜂觸角轉(zhuǎn)錄組總計產(chǎn)出7154582040nt數(shù)據(jù),contigs序列89469條,經(jīng)組裝得到Unigene 60198個,其中的30959條被注釋到NR蛋白數(shù)據(jù)庫。NR注釋的結(jié)果顯示61.5%的班氏跳小蜂Unigenes能夠與蠅蛹金小蜂Nasonia vitripennis的基因序列比對上。通過篩選和在NCBI上比對,從班氏跳小蜂觸角轉(zhuǎn)錄組中發(fā)現(xiàn)有OBPs 54條,其中4條為片段,ORs 226條,其中有63條片段;41條GRs,其中有13條片段;3條全長的SNMPs。2班氏跳小蜂OBP的表達模式通過q-PCR檢測了10個Abam OBPs基因在班氏跳小蜂雌雄蟲不同部位的表達量。結(jié)果顯示,基因Abam OBP31在雌蟲觸角特異性表達;基因Abam OB1、Abam OBP23、Abam OBP24和Abam OBP30在雄蟲觸角特異性表達。基因Abam OBP26、Abam OB34和Abam OBP43高表達于雌蟲足部;而基因Abam OBP2和Abam OBP50在雌、雄蟲的頭部特異性表達。3班氏跳小蜂Abam OBP1與氣味物質(zhì)的結(jié)合特性分析克隆了Abam OBP1基因,構(gòu)建了以p ET-17b為表達載體的重組質(zhì)粒(p ET17b-Abam OBP1),通過原核表達最終獲得了純的蛋白Abam OBP1;利用熒光競爭結(jié)合技術(shù)測定了不同p H值條件下Abam OBP1與22種棉花揮發(fā)物單體的結(jié)合特性。結(jié)果表明,在酸性環(huán)境下,Abam OBP1與大部分揮發(fā)物的結(jié)合能力普遍高于中性環(huán)境下。酸性條件下,除了與壬醛和辛二酸二乙酯這兩種物質(zhì)的結(jié)合能力較差(20μMKi50μM),Abam OBP1蛋白與大部分氣味物質(zhì)的結(jié)合能力都較強(Ki≤20μM)。在中性條件下,Aban OBP1與1-辛烯-3-酮、2,4,4-三甲基-2-戊烯、苯甲酸甲酯、十二烷、橙花叔醇、(S)-(-)-檸檬烯、(R)-(-)-檸檬烯和芳樟醇的結(jié)合能力較強(Ki≤20μM)。4班氏跳小蜂對氣味物質(zhì)的行為反應(yīng)利用Y-型嗅覺儀測定了班氏跳小蜂成蟲對1-辛烯-3-酮、2,4,4-三甲基-2-戊烯和S-(-)-檸檬烯這3種揮發(fā)物單體的行為反應(yīng)。結(jié)果表明,班氏跳小蜂雌蟲和雄蟲對1-辛烯-3-酮、2,4,4-三甲基-2-戊烯均表現(xiàn)出明顯的偏好性,且班氏跳小蜂的雄蟲對2,4,4-三甲基-2-戊烯的選擇性達極顯著水平,但班氏跳小蜂雌、雄蟲對S-(-)-檸檬烯無明顯的選擇性。
[Abstract]:On the basis of constructing and analyzing its antennal transcriptome , it has been found that it is a serious invasive pest in China . The results of this study are as follows : In this paper , we find out that there are 63 fragments , including 13 fragments , and 3 full - length SNMPs . Aban OBP1 and Abam OBP50 were highly expressed in the foot of female worm . The binding ability of Aban OBP1 and Abam OBP50 was higher than that in neutral environment ( Ki 鈮，

本文編號：1751468