本文選題：維氏氣單胞菌菌蛻 + 鯉(Cyprinus�。� 參考：《上海海洋大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：細(xì)菌性疾病作為水產(chǎn)動(dòng)物疾病主要類(lèi)型,對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失,同時(shí)一些人獸共患病原菌潛在威脅著人類(lèi)健康。維氏氣單胞菌CL0901株是發(fā)病錦鯉體內(nèi)分離的一株革蘭氏陰性桿菌,具有較強(qiáng)致病性,感染魚(yú)體表出現(xiàn)潰瘍,病變部位鱗片脫落,肌肉外露等癥狀。目前針對(duì)細(xì)菌性疾病的化學(xué)方法和抗生素治療存在著很多弊端,相比之下疫苗接種是較安全有效手段,因此很多學(xué)者對(duì)用疫苗來(lái)提高水產(chǎn)動(dòng)物免疫力進(jìn)行了大量探索。而在諸多疫苗中,菌蛻是革蘭氏陰性菌被噬菌體PhiX174裂解基因E的產(chǎn)物裂解后形成的完整細(xì)菌空殼,在滅活過(guò)程中與傳統(tǒng)的甲醛滅活苗比較,保留了完整細(xì)胞形態(tài)和表面抗原并且兼具一些佐劑的性質(zhì),能夠直接刺激魚(yú)體免疫反應(yīng),使其成為新型疫苗重要候選者,但其研究偏重構(gòu)建方面,為推動(dòng)此種疫苗發(fā)展和推廣,對(duì)其接種后引起水產(chǎn)動(dòng)物免疫效應(yīng)研究十分必要,查閱大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),多數(shù)學(xué)者對(duì)水生動(dòng)物接種疫苗后免疫效應(yīng)機(jī)制探討都從特異性免疫即抗體效價(jià)和免疫保護(hù)率著手,對(duì)非特異性免疫反應(yīng)及更深層次免疫相關(guān)基因研究很少。為了更全面了解菌蛻疫苗對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物免疫效應(yīng),本研究用制備的致病性維氏氣單胞菌CL0901株菌蛻接種鯉,在實(shí)驗(yàn)條件下研究了免疫菌蛻后鯉(Cyprinus carpio)特異性、非特異性免疫指標(biāo)及hepcidin基因表達(dá)量的變化,綜合探討維氏氣單胞菌菌蛻對(duì)鯉免疫的影響,進(jìn)一步為菌蛻疫苗在引起魚(yú)類(lèi)免疫保護(hù)途徑和效果方面提供一些科學(xué)參考。本論文主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:實(shí)驗(yàn)條件下培養(yǎng)含有裂解基因E重組質(zhì)粒pBBR1MCS2-E的重組維羅納氣單胞菌CL0901株,在42℃誘導(dǎo)裂解基因E表達(dá)12-16小時(shí),收集菌蛻。在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)的第1、15和29天使用菌蛻疫苗(CLGs)和甲醛滅活疫苗(FKC)對(duì)鯉進(jìn)行注射3次免疫,并設(shè)一個(gè)注射PBS的對(duì)照組,每個(gè)組設(shè)3個(gè)重復(fù)。從第一次免疫后每隔7 d從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)取三尾魚(yú)進(jìn)行取樣,最后進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)。對(duì)血清抗體滴度、相對(duì)免疫保護(hù)率(RPS)、溶菌酶(LZM)、呼吸爆發(fā)、補(bǔ)體C3、髓過(guò)氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、堿性磷酸酶(ALP)及hepcidin基因表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定。(1)采用凝集抗體效價(jià)方法測(cè)定免疫維氏氣單胞菌CL0901株菌蛻后鯉血清不同時(shí)間抗體效價(jià)變化,并對(duì)取樣后的受免魚(yú)體進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn),觀察死亡情況測(cè)定相對(duì)免疫保護(hù)率RPS,發(fā)現(xiàn)菌蛻組抗體凝集效價(jià)在免疫后35天達(dá)26-28,顯著高于FKC和PBS組(P0.05),并能維持一定時(shí)間;而且CLGs組的RPS為57.70%、FKC組RPS為30.77%。表明免疫菌蛻能夠有效提升抗體水平并能起到良好免疫保護(hù)作用。(2)用NBT法測(cè)定不同實(shí)驗(yàn)組免疫魚(yú)體呼吸爆發(fā)作用并用相應(yīng)的試劑盒測(cè)定血清中相關(guān)免疫酶類(lèi)活性。結(jié)果顯示二次免疫后,CLGs組呼吸爆發(fā)、LZM、MPO含量顯著高于PBS組(P0.05),MDA含量顯著低于PBS組(P0.05);CLGs組C3含量在35和42 d顯著低于PBS組(P0.05);ALP含量顯著低于FKC組和PBS組(P0.05);SOD含量在7、28、42天顯著低于PBS組(P0.05);可以看出維氏氣單胞菌CL0901株菌蛻免疫的鯉,其非特異免疫在二次免疫后部分得到顯著增強(qiáng)。(3)采用實(shí)時(shí)熒光定量的方法測(cè)定免疫相關(guān)基因表達(dá)量。免疫菌蛻后抗菌肽hepcidin基因表達(dá)主要發(fā)生在肝臟,脾臟次之,頭腎中最低,其中頭腎中CLGs組的hepcidin基因表達(dá)量在21天顯著高于FKC和PBS組(P0.05);肝臟和脾臟中CLGs組的hepcidin基因表達(dá)量在28天均顯著高于FKC和PBS組(P0.05)。綜合分析維氏氣單胞菌菌蛻在免疫鯉時(shí)二次免疫后到免疫28天,機(jī)體呼吸爆發(fā)作用提高,血清溶菌酶、髓過(guò)氧化物酶含量大幅度提升,hepcidin基因表達(dá)量顯著提高,執(zhí)行非特異性免疫,對(duì)侵入機(jī)體病原菌進(jìn)行清除,免疫35天后有血清特異性抗體效價(jià)顯著升高發(fā)揮特異性免疫作用;且菌蛻在提升血清抗體水平、呼吸爆發(fā)作用、溶菌酶、髓過(guò)氧化物酶含量及hepcidin基因表達(dá)量作用強(qiáng)于甲醛滅活苗。
[Abstract]:In order to understand the effect of the vaccine on the immune response of aquatic animals , it is very necessary to study the specific , non - specific immune index and the effect of the vaccine . The results are as follows : In order to better understand the immune response of the vaccine to aquatic animals , it is very necessary to study the immune response mechanism of the vaccine . ( 1 ) The antibody titer of CLGs group was significantly higher than that in PBS group ( P0.05 ) , and the level of serum lysozyme and MPO was significantly higher than that in PBS group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S948

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1732563