本文關(guān)鍵詞：玉米轉(zhuǎn)錄因子ZmWRKY19基因的克隆及功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《西北農(nóng)林科技大學(xué)》 2015年

玉米轉(zhuǎn)錄因子ZmWRKY19基因的克隆及功能研究

嚴(yán)俊  

【摘要】：玉米(Zea mays L.)是我國第一大農(nóng)作物,然而干旱、鹽漬、冷害、病蟲害等逆境環(huán)境嚴(yán)重影響玉米的產(chǎn)量和質(zhì)量。利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)掘抗病蟲害等抗逆基因并將之應(yīng)用于玉米育種,可以提高農(nóng)作物抗性。WRKY轉(zhuǎn)錄因子不僅參與植物生長發(fā)育和生長代謝表達(dá)調(diào)控,還廣泛涉及植物對逆境脅迫的應(yīng)答反應(yīng)。本研究通過同源克隆的方法從玉米B73中克隆Zm WRKY19基因,在擬南芥中超表達(dá)并對其抗逆功能進(jìn)行初步分析,研究結(jié)果如下:1.采用PCR方法克隆了Zm WRKY19基因。該基因在玉米數(shù)據(jù)庫中Gene ID為GRMZM2G382350,基因全長5212 bp,編碼區(qū)為723 bp,共編碼240個(gè)氨基酸。氨基酸序列中包括一個(gè)典型的WRKY保守結(jié)構(gòu)域,鋅指結(jié)構(gòu)為C2HC型。該基因編碼蛋白分子量為26.8 KD,等電點(diǎn)為6.25。2.通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測該基因?qū)Ω鞣N逆境脅迫的應(yīng)答,結(jié)果表明該基因?qū)λ畻钏帷Ⅺ}脅迫、42℃熱激等處理有響應(yīng)。3.構(gòu)建了亞細(xì)胞定位載體。分別轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞和煙草細(xì)胞,亞細(xì)胞定位結(jié)果表明該基因表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞核中;構(gòu)建熒光雙報(bào)告載體,在玉米愈傷原生質(zhì)體中驗(yàn)證目的基因的轉(zhuǎn)錄活性,瞬時(shí)轉(zhuǎn)化結(jié)果表明基因具有轉(zhuǎn)錄激活活性。4.構(gòu)建了Zm WRKY19基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)GUS基因表達(dá)載體。轉(zhuǎn)化擬南芥并進(jìn)行組織化學(xué)染色,檢測基因在不同組織的表達(dá)情況。結(jié)果表明該基因主要在葉脈中表達(dá),且主要在成熟葉片中表達(dá)。5.克隆并構(gòu)建擬南芥超表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌侵染的方法轉(zhuǎn)化擬南芥,獲得了一系列純合高表達(dá)株系。對高表達(dá)株系進(jìn)行紋枯病接菌實(shí)驗(yàn),電導(dǎo)率測定結(jié)果表明Zm WRKY19提高了擬南芥抗紋枯病能力6.克隆了Zm WRKY19基因組DNA全長并構(gòu)建了玉米超表達(dá)載體。通過農(nóng)桿菌侵染和基因槍轟擊兩種方法轉(zhuǎn)化玉米Hi II幼胚,獲得一批轉(zhuǎn)化再生植株。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S513;Q943.2
【目錄】：

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