本文選題：長角血蜱　切入點：轉(zhuǎn)錄組　出處：《河北師范大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：蜱是一種專性吸血的外寄生節(jié)肢動物,可攜帶并傳播多種病原體,造成人、畜患上疾病甚至死亡,嚴(yán)重影響人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展。長角血蜱Haemaphysalis longicornis隸屬于硬蜱科Ixodidae血蜱屬Haemaphysalis,該物種分布廣泛,數(shù)量眾多,危害性極大。長角血蜱為完成整個生活史需要吸食大量宿主血液,其中唾液腺作為重要器官,可分泌多種促進(jìn)吸血和消化的活性分子,幫助長角血蜱完成正常的吸血活動。研究唾液腺不同吸血時期蛋白差異表達(dá)對于闡明長角血蜱的唾液腺吸血的分子機制,進(jìn)而全面揭示長角血蜱的生存適應(yīng)對策具有重要意義。本實驗利用第二代測序技術(shù)對長角血蜱雌蜱饑餓期、交配前吸血期、交配后半飽期和飽血期的四個吸血階段進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。測序并合并組裝,共產(chǎn)生87825條Unigene,其中長度在1Kb以上的Unigene有13222條,進(jìn)行功能注釋,共注釋29109條Unigene。利用該轉(zhuǎn)錄組序列作為數(shù)據(jù)庫,進(jìn)行長角血蜱唾液腺4個不同吸血時期所有蛋白質(zhì)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究。最終通過基于iTRAQ的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),以長角血蜱4個不同吸血時期的唾液腺蛋白作為研究對象,鑒定到表達(dá)差異蛋白3223條,其中具有注釋信息的蛋白3164條,未注釋蛋白59條。利用生物信息學(xué)方法對差異表達(dá)蛋白進(jìn)行系統(tǒng)分析,最終發(fā)現(xiàn)了眾多與調(diào)控促進(jìn)吸血蛋白表達(dá)和運輸相關(guān)的蛋白,我們挑選了其中一些重要蛋白進(jìn)行了RNA干擾,例如驅(qū)動蛋白、動力蛋白、網(wǎng)格蛋白、分選蛋白、半乳糖激酶和腺苷酰硫酸激酶,最終發(fā)現(xiàn)驅(qū)動蛋白和動力蛋白被干擾后,雌蜱吸血受到明顯抑制,導(dǎo)致其過早從宿主體表脫落甚至死亡。通過功能分析,我們推測兩種蛋白在長角血蜱吸血功能分子運輸過程中起著重要作用。本論文利用定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法對長角血蜱不同吸血時期唾液腺蛋白進(jìn)行研究,并結(jié)合研究結(jié)果篩選到能明顯影響雌蜱吸血的兩種蛋白----驅(qū)動蛋白和動力蛋白,這兩種蛋白也是首次在長角血蜱中得到報道。實驗結(jié)果對于闡明長角血蜱唾液腺生理變化的分子機制以及長角血蜱適應(yīng)吸血的分子機制具有重要意義,對于通過分子手段抑制蜱類吸血具有一定的指導(dǎo)意義,并為蜱類的綜合防治提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Tick is a specialized blood sucking parasite arthropod, can carry and spread a variety of pathogens, causing human, animal disease or even death, Haemaphysalis longicornis belongs to the genus Haemaphysalis, which belongs to the genus Haemaphysalis of the family Ixodidae. The species is widely distributed, abundant and harmful. Haemaphysalis longicornis needs to take a lot of host blood in order to complete the whole life cycle of Haemaphysalis. The salivary gland, as an important organ, can secrete a variety of active molecules that promote blood sucking and digestion. To help Haemaphysalis longicornis to complete normal blood sucking activities. To study the molecular mechanism of salivary gland blood sucking of Haemaphysalis longicornis by studying the differential expression of protein in different blood sucking stages of salivary gland. Therefore, it is of great significance to reveal the survival and adaptation strategies of Haemaphysalis longicornis. The second generation sequencing technique was used to study the feeding period and the blood sucking stage of Haemaphysalis longicornii. After mating, four transcriptome sequences were sequenced in half full period and full blood stage. The sequence was combined and assembled to produce 87825 Unigenees, of which 13222 Unigene with length above 1Kb were annotated. This transcriptional sequence was used as a database to study the quantitative proteomics of all proteins in the salivary glands of Haemaphysalis longicornis at four different stages of bloodsucking. Finally, the quantitative proteomics technique based on iTRAQ was used. The salivary gland proteins of Haemaphysalis longicornis at four different stages were identified as expressing 3223 differentially expressed proteins, among which 3164 were annotated. 59 unannotated proteins. The differential expression proteins were systematically analyzed by bioinformatics, and many proteins related to regulating and promoting the expression and transport of blood-sucking proteins were found. We selected some of the important proteins for RNA interference, such as proteins such as driving protein, dynamic protein, grid protein, sorting protein, galactose kinase and adenosine sulfate kinase, and finally found that the protein and dynamic protein were interfered. Female ticks' blood sucking is significantly inhibited, resulting in premature abscission or even death from the host's body surface. We speculate that two proteins play an important role in the molecular transport of Haemaphysalis longicornis. In this paper, the salivary gland proteins of Haemaphysalis longicornis were studied by quantitative proteomics. Combined with the results of the study, two kinds of proteins, which can significantly affect the blood absorption of female ticks, were screened out. These two proteins were also reported for the first time in Haemaphysalis longicornis. The experimental results are of great significance in elucidating the molecular mechanism of the physiological changes of salivary glands of Haemaphysalis longicornis and the molecular mechanisms of Haemaphysalis longicornis adapting to blood sucking. It has certain guiding significance for the inhibition of ticks' blood sucking by molecular means, and provides the theoretical basis for the comprehensive control of ticks.
【學(xué)位授予單位】：河北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.746;R384.4

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本文編號：1680209