本文選題：銅綠假單胞菌　切入點：肺炎克雷伯菌　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目前水貂養(yǎng)殖以散養(yǎng)戶為主,養(yǎng)殖戶的防疫管理意識淡薄,高密度養(yǎng)殖、糞便污染和抗生素濫用導(dǎo)致攜毒力因子的銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌等環(huán)境常在菌出現(xiàn)并大量繁殖,病原菌引起的耐藥性問題日益突出。近年來,銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌引起的水貂肺炎常于水貂的換毛期暴發(fā)流行,給養(yǎng)殖戶帶來重大經(jīng)濟(jì)損失。鑒于目前市場應(yīng)用的疫苗均為臨床分離的完整菌體抗原存在攜帶耐藥基因和毒力基因的風(fēng)險,以及由于血清型的復(fù)雜致使免疫效果不確實的問題,本研究從臨床分離的貂出血性肺炎強(qiáng)毒株-銅綠假單胞菌精制蛋白組份和肺炎克雷伯菌提取莢膜多糖作為抗原,制備了針對兩病原的水貂銅綠假單胞菌-肺炎克雷伯菌二聯(lián)亞單位疫苗,并應(yīng)用于水貂養(yǎng)殖場新生仔貂的免疫,驗證該疫苗對水貂肺炎的防控效果。本研究分別以常規(guī)方法提取并精制的肺炎克雷伯菌莢膜多糖和離子交換層析法提取臨床貂出血性肺炎強(qiáng)毒分離株銅綠假單胞菌培養(yǎng)物中抗原成分,將各抗原以氫氧化鋁為佐劑進(jìn)行配苗,設(shè)置不同抗原組別,免疫小鼠后進(jìn)行攻毒保護(hù)性實驗,實驗結(jié)果表明:銅綠假單胞菌菌體裂解上清液氫氧化鋁佐劑抗原與銅綠假單胞菌滅活菌體抗原免疫小鼠后均能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性抗體,兩種抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體水平無顯著差異,即兩種抗原針對銅綠假單胞菌臨床分離強(qiáng)毒株的攻擊的水貂具有相當(dāng)水平的保護(hù)作用;肺炎克雷伯菌莢膜多糖具有良好的抗原性,誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性抗體水平高于肺炎克雷伯菌菌體抗原,且差異顯著(P㩳0.05)。為驗證各抗原對原宿主動物水貂的免疫保護(hù)作用,將優(yōu)化各抗原組份,按滅活疫苗免疫程序免疫水貂,攻毒保護(hù)性實驗結(jié)果表明:銅綠假單胞菌菌體裂解上清液精制的多組份蛋白抗原誘導(dǎo)水貂產(chǎn)生的特異性抗體,抗體水平與銅綠假單胞菌滅活菌體抗原相比差異不顯著。將銅綠假單胞菌菌體裂解上清液精制的多組份蛋白和肺炎克雷伯菌莢膜多糖抗原以氫氧化鋁為佐劑進(jìn)行配苗,制備出銅綠假單胞菌-肺炎克雷伯菌二聯(lián)亞單位疫苗中莢膜多糖具有良好的抗原性,對水貂銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌引起的肺炎具有100%的保護(hù)作用。批量制備銅綠假單胞菌-肺炎克雷伯菌二聯(lián)亞單位疫苗,在水貂養(yǎng)殖場推廣應(yīng)用研究結(jié)果顯示:在水貂生產(chǎn)中,銅綠假單胞菌-肺炎克雷伯菌二聯(lián)亞單位疫苗免疫當(dāng)年生產(chǎn)的仔貂對銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌引起的水貂肺炎具有良好的保護(hù)作用。綜上,肺炎克雷伯菌莢膜多糖與銅綠假單胞菌精制多蛋白組份抗原制備二聯(lián)亞單位疫苗能夠克服兩病原的毒力增強(qiáng)及耐藥性問題,對水貂具有良好的保護(hù)效果,可以作為一種用于水貂肺炎防控的安全、高效、無生物風(fēng)險的亞單位候選疫苗。
[Abstract]:At present, mink farming is dominated by scattered farmers, whose awareness of epidemic prevention management is weak, high density culture, fecal pollution and abuse of antibiotics lead to the presence of Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae, which carry virulence factors, and so on. In recent years, mink pneumonia caused by Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae has become more prevalent in mink than in mink. Since the vaccines currently used in the market are all clinical isolates of intact bacterial antigens, there is a risk of carrying drug-resistant and virulent genes, and because of the complexity of serotypes, the immune effect is uncertain. In this study, capsule polysaccharides were extracted from purified protein components of Pseudomonas aeruginosa strain and Klebsiella pneumoniae strain as antigen. A binomial vaccine against Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae was prepared and used to immunize minks in mink farms. To verify the efficacy of the vaccine in the prevention and control of mink pneumonia. In this study, we used routine extraction and purification of Klebsiella pneumoniae capsule polysaccharides and ion exchange chromatography to extract pseudomonas aeruginosa from mink hemorrhagic pneumonia isolates. Antigenic components in bacterial cultures, Each antigen was inoculated with aluminum hydroxide as adjuvant, and different antigen groups were set up. The results showed that both aluminum hydroxide adjuvant antigen and inactivated Pseudomonas aeruginosa antigen could induce the production of specific antibodies in mice after immunization with the supernatant of Pseudomonas aeruginosa. There was no significant difference between the two antigen-induced antibody levels, that is, the minks attacked by the two antigens against the clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa had a significant protective effect, and Klebsiella pneumoniae capsule polysaccharides had good antigenicity. The specific antibody level induced in mice was higher than that of Klebsiella pneumoniae antigen, and the difference was significant (P < 0.05). In order to verify the immune protective effect of each antigen on mink, the antigen components will be optimized and the mink will be immunized according to the program of inactivated vaccine immunization. The results showed that the purified multicomponent protein antigen of Pseudomonas aeruginosa induced the specific antibody of mink. There was no significant difference between the antibody level and the inactivated bacterial antigen of Pseudomonas aeruginosa. The multicomponent protein purified from the supernatant of Pseudomonas aeruginosa and the capsule polysaccharide antigen of Klebsiella pneumoniae were mixed with aluminum hydroxide as adjuvant. The capsule polysaccharides of Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae double subunit vaccine were prepared. Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae have a 100% protective effect on pneumonia caused by Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae. The results of the research on popularization and application in mink farms show that: in mink production, Pseudomonas aeruginosa-Klebsiella pneumoniae duplex subunit vaccine has a good protective effect on mink pneumonia caused by Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae. The preparation of biphasic subunit vaccine with Klebsiella pneumoniae capsule polysaccharide and purified polyprotein component antigen of Pseudomonas aeruginosa can overcome the problems of virulence enhancement and drug resistance of the two pathogens and have a good protective effect on mink. It can be used as a safe, efficient and biohazard subunit candidate vaccine for mink pneumonia prevention and control.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.92

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本文編號：1665625