本文選題：鰻鱺　切入點：人工催熟　出處：《上海海洋大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：鰻鱺經(jīng)濟價值高、營養(yǎng)豐富。目前,鰻鱺的人工繁育還未取得成功。深入開展鰻鱺繁殖生物學基礎(chǔ)研究,從根本上解決鰻鱺人工繁殖技術(shù)難關(guān),這才是解決問題的根本途徑。本研究以捕撈的野生降海鰻鱺為材料,利用外源激素誘導鰻鱺卵巢發(fā)育成熟,對人工催熟過程中鰻鱺外部形態(tài)指標進行監(jiān)測;對卵巢發(fā)育不同時期,鰻鱺血清及性腺中類固醇激素濃度的變化進行研究。應用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(ultra high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)方法對樣品進行測定分析,通過對質(zhì)譜參數(shù)、液相參數(shù)及樣品前處理方法進行優(yōu)化,方法檢測限及回收率等均達到殘留檢測的要求。應用本方法對鰻鱺血清及性腺內(nèi)類固醇激素進行定量分析,具有靈敏、高回收率、準確、穩(wěn)定的特點。對于實際樣品的檢測及研究,具體研究內(nèi)容如下:1、采用多次肌肉注射外源激素CPE(鯉魚腦垂體,20mg/kg·次)+h CG(人絨毛膜促性腺激素,300IU/kg·次)混合物勻漿液的方法,誘導雌性鰻鱺性腺發(fā)育成熟。其中,對照組雌性鰻鱺性腺成熟系數(shù)基本不變,最高時也只有(2.25±0.23)%,性腺基本不發(fā)育;實驗組雌性鰻鱺性腺逐漸發(fā)育成熟,GSI顯著升高,最高時高達(23.14±3.87)%,性腺發(fā)育良好,激素作用效果明顯。2、利用UPLC-MS/MS方法測定分析雌性鰻鱺發(fā)育成熟過程中血清內(nèi)六種類固醇激素:睪酮(Testosterone,T)、17α-羥基孕酮(17α-hydroxyprogesterone,17α-OHP)、17α,20β-二羥基-4-孕烯-3-酮(17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one,DHP)、雌酮(estrone,E1)、雌二醇(estradiol-17β,E2)、雌三醇(estriol,E3)的含量變化。結(jié)果表明,6種類固醇激素的線性范圍為12.5~125 ng/mL,線性關(guān)系良好(r0.99);血清樣品在25ng/mL添加水平下的平均回收率為86.9%~98%,相對標準偏差為1.7%~9.5%;方法檢出限(S/N10)為0.1ng/mL。對樣品進行測定,結(jié)果表明,隨著注射次數(shù)的增加(產(chǎn)卵之前),實驗組鰻鱺血清內(nèi)6種類固醇激素的濃度均呈現(xiàn)逐步增加的趨勢,其濃度均高于對照組(對照組E1、E3未檢測到),實驗組T、17α-羥基孕酮、DHP、E1、E2均在產(chǎn)卵期最高,E3在未產(chǎn)卵期最高。對照組鰻鱺血清中T、17α-羥孕酮、DHP、E2的含量均處于一個較低水平,平均濃度分別為(3.65±0.63)、(2.53±0.49)、(2.27±0.24)、(2.46±0.47)ng/mL。3、利用UPLC-MS/MS方法測定分析雌性鰻鱺發(fā)育成熟過程中性腺內(nèi)四種類固醇激素(T、DHP、E2、E3)含量變化。結(jié)果顯示,4種類固醇激素的線性范圍為25~250 ng/mL,線性關(guān)系良好(r0.99);性腺樣品在25ng/mL添加水平下的平均回收率為73.6%~88.1%,相對標準偏差為1.9%~9.7%;方法檢出限(S/N10)為0.1ng/g。隨著注射次數(shù)的增加,實驗組鰻鱺性腺內(nèi)4種類固醇激素均呈現(xiàn)增加的趨勢,其濃度均高于對照組(對照組E2、E3未檢測到)。對照組鰻鱺性腺中T、DHP的含量均處于一個較低水平,且整個周期中未檢測到E2和E3。實驗組鰻鱺性腺中T含量的增加趨勢較緩慢,產(chǎn)卵時濃度最高(7.25±1.88)ng/g,顯著高于對照組(p0.05)。實驗組DHP含量總體呈升高的趨勢,未產(chǎn)卵組DHP含量達最高(17.79±4.69)ng/g。E3在整個發(fā)育過程呈無規(guī)則變化。4、利用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)測定分析性腺中類固醇激素的水平。結(jié)果顯示,與實驗組相比,對照組雌性鰻鱺性腺中P、17α-OHP含量相對較高(含量分別為2.83±0.28、19.07±3.03ng/g),對照組T、DHP、E3、E1、E2較低(含量分別為1.07±0.14、0.35±0.08、0.33±0.08 ng/g,33.45±3.46 pmol/L,55.2±4.69 ng/L);實驗組T、P、17α-OHP及DHP呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢,而E2水平逐漸降低,E1呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢,E3在整個實驗周期內(nèi)變化幅度不大。其中,P、DHP及E3水平在未產(chǎn)卵組最高,值分別為3.76±0.25、2.41±0.14、1.69±0.23 ng/g;T水平在產(chǎn)卵組最高,含量為3.26±0.45 ng/g;E2、E1及17α-OHP分別在第3、7、11次激素注射后激素水平達到峰值,含量分別為60.09±2.26 ng/L、46.37±4.37 pmol/L、27.17±1.53 ng/g。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

【參考文獻】

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1 林靜;湛嘉;帥滇;王婷;王倩;王磊;俞雪鈞;劉利平;;人工誘導花鰻鱺成熟過程中卵巢內(nèi)6種性類固醇激素的含量及變化[J];水產(chǎn)學報;2015年09期

2 齊鑫;黃海;周雯伊;尹紹武;張勇;劉曉春;陳國華;林浩然;;激素誘導花鰻鱺精巢發(fā)育成熟期間性激素水平及相關(guān)細胞的超顯微結(jié)構(gòu)[J];熱帶海洋學報;2010年06期

3 林浩然;齊鑫;周雯伊;尹紹武;黃海;張勇;劉曉春;陳國華;;人工誘導花鰻鱺卵巢發(fā)育成熟及相關(guān)激素和組織的作用[J];水產(chǎn)學報;2010年07期

4 管衛(wèi)兵;丁華騰;宣富君;戴小杰;朱江峰;;長江口環(huán)境條件對日本鰻鱺(Anguilla japonica)鰻苗溯河洄游的影響[J];海洋通報;2009年02期

5 婁甜甜;齊興柱;尹紹武;黃海;廖經(jīng)球;陳國華;張本;;鰻鱺種質(zhì)資源的研究進展[J];水產(chǎn)科學;2007年06期

6 秦燕;陳捷;張美金;;動物肌肉組織中甾類同化激素多組分殘留的液相色譜-質(zhì)譜檢測方法[J];分析化學;2006年03期

7 柳凌,郭峰,張潔明,魯大椿;日本鰻鱺排卵的人工誘導[J];中國水產(chǎn)科學;2005年01期

8 丁雅韻,徐曉云,謝孟峽,楊清峰,劉素英;動物組織中己烯雌酚殘留的基體固相擴散-氣相色譜-質(zhì)譜分析方法研究[J];分析化學;2003年11期

9 陳華才;簡論農(nóng)藥殘留量檢測中的樣品前處理技術(shù)[J];中國計量學院學報;2002年03期

10 張利紅,張為民,林浩然;雄烯二酮和甲基睪酮誘導雄性日本鰻鱺性腺發(fā)育的作用[J];動物學研究;2001年02期

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本文編號：1614126