發(fā)布時間：2018-03-05 17:04

  本文選題：尼羅羅非魚　切入點(diǎn)：淋巴細(xì)胞抗原　出處：《生物技術(shù)》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：[目的]獲得尼羅羅非魚淋巴細(xì)胞抗原75(OnLy75)基因的cDNA序列和多克隆抗體。[方法]采用RACE技術(shù)克隆OnLy75基因的cDNA全序列,通過DNAMAN、MEGA等軟件分析其序列特征;構(gòu)建OnLy75的原核表達(dá)載體,并對其重組蛋白進(jìn)行原核誘導(dǎo)表達(dá);將純化后的OnLy75重組蛋白免疫新西蘭大耳白兔,并通過Western Blot技術(shù)檢測多克隆抗體的效果。[結(jié)果]OnLy75的cDNA序列全長為6 632 bp,開放閱讀框5 199 bp,編碼1 732個氨基酸。其OnLy75重組蛋白主要存在于包涵體中;將重組蛋白純化后免疫新西蘭大耳白兔,成功獲得了兔抗OnLy75多克隆抗體。用該多抗對尼羅羅非魚不同器官進(jìn)行Western Blot內(nèi)源性檢測,結(jié)果顯示該蛋白在精巢中有豐富的表達(dá)。[結(jié)論]兔抗OnLy75多克隆抗體的成功制備,為進(jìn)一步深入研究OnLy75在尼羅羅非魚組織中的定位及功能研究提供了工具。
[Abstract]:[objective] to obtain the cDNA sequence and polyclonal antibody of the lymphocytic antigen 75on Ly75 gene of tilapia niloticus. [methods] the whole cDNA sequence of OnLy75 gene was cloned by RACE technique, the sequence characteristics were analyzed by DNAMANMAGA-MEGA, and the prokaryotic expression vector of OnLy75 was constructed. The recombinant protein was induced by prokaryotic expression and purified OnLy75 recombinant protein was immunized with New Zealand white rabbit. The effect of polyclonal antibody was detected by Western Blot. [results] the cDNA sequence of OnLy75 was 6 632 BP, open reading frame 5 199 BP, encoding 1 732 amino acids. Its OnLy75 recombinant protein mainly existed in inclusion body. The purified recombinant protein was used to immunize New Zealand white rabbits with OnLy75 polyclonal antibody, which was used to detect Western Blot in different organs of Nile tilapia (Tilapia niloticus). [conclusion] the successful preparation of rabbit polyclonal antibody against OnLy75 provides a tool for further study on the localization and function of OnLy75 in tilapia niloticus tissue.
【作者單位】： 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)資源利用與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)資金-羅非魚產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-49) 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31502205) 廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2014A030310337)
【分類號】：Q78

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本文編號：1571128