本文關(guān)鍵詞： 牙鲆 多聚免疫球蛋白受體(plgR) IgM 黏膜免疫　出處：《中國海洋大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：黏膜免疫系統(tǒng)作為免疫防御的第一道防線,能夠參與保護(hù)機(jī)體免受病原體的侵害。黏膜免疫系統(tǒng)以分泌型免疫球蛋白(slgs)為主要的防御因子。多聚免疫球蛋白受體(polymeric immunoglobulin receptor, pIgR)是黏膜免疫中的重要組成成分,其特異性地轉(zhuǎn)運(yùn)sIgs通過上皮細(xì)胞保護(hù)機(jī)體。因此pIgR的有效分泌是多聚免疫球蛋白發(fā)揮黏膜防御功能的必要條件,在黏膜免疫中起著舉足輕重的作用。目前對(duì)硬骨魚類pIgR的研究已經(jīng)日漸活躍,而pIgR與sIgs的免疫應(yīng)答動(dòng)態(tài)也備受關(guān)注。本文利用滅活鰻弧菌(Vibrio anguillarum)通過注射和浸泡兩種方式免疫牙鲆(Paralichthys olivaceus),測(cè)定了免疫后牙鲆組織中pIgR與IgM基因水平的表達(dá)變化,并檢測(cè)了免疫后牙鲆皮膚黏液、鰓黏液、腸黏液及膽汁中pI及IgM蛋白水平的表達(dá)變化,研究了血清、膽汁及三種黏液中的pI-IgM復(fù)合物,最后定位pIgR及JgM在牙鲆黏膜免疫相關(guān)組織中的分布,為進(jìn)一步研究硬骨魚類黏膜免疫機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。本文具體研究結(jié)果如下：用滅活鰻弧菌采用注射和浸泡兩種方式對(duì)牙鲆進(jìn)行免疫,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)免疫后牙鲆各組織中pIgR及IgM基因水平表達(dá)變化進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明,免疫后的牙鲆各組織中pIgR基因的表達(dá)變化趨勢(shì)與IgM基本一致,都呈現(xiàn)先上調(diào)后下調(diào)的趨勢(shì),然而pIgR基因水平上升比IgM快,到達(dá)峰值的時(shí)間也比IgM早.在皮膚、鰓和后腸中,浸泡組pIgR的峰值高于注射組,而在其余組織中,則低于注射組;在皮膚和鰓中,浸泡組IgM的峰值高于注射組,而在其余組織中,則低于注射組。利用ELISA法對(duì)鰻弧菌免疫后牙鲆pIgR及IgM蛋白水平的表達(dá)變化進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,各免疫組中pIgR與IgM的蛋白水平變化趨勢(shì)基本一致,在一段時(shí)間之內(nèi)均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),然而pIgR蛋白水平上升比IgM快,到達(dá)峰值的時(shí)間也比IgM早。在皮膚黏液和腸黏液中,浸泡組pIgR的峰值較注射組高,而在鯉黏液和膽汁中,其峰值較注射組低：在皮膚黏液和鰓黏液中,浸泡組IgM的峰值較注射組高,而在腸黏液和膽汁中,其峰值較注射組低。將牙鲆血清、皮膚黏液、鰓黏液、腸黏液及膽汁在非變性電泳條件下進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,抗牙鲆血清IgM單抗2D8和抗牙鲆皮膚黏液單抗1A2與牙鲆血清、皮膚黏液、鰓黏液、腸黏液及膽汁均反應(yīng),均在分子量約800kD處出現(xiàn)單一條帶；抗牙鲆pIgR多抗與牙鲆皮膚黏液、鰓黏液、腸黏液及膽汁均在約800kDa處發(fā)生特異性反應(yīng),而與血清無特異性反應(yīng)。利用抗牙鲆pIgR多抗及抗牙鲆IgM單抗2D8對(duì)牙鲆黏膜免疫相關(guān)組織皮膚、鰓、后腸及肝臟進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。結(jié)果顯示,兩種抗體的染色結(jié)果大體一致,在四種組織中均出現(xiàn)了明顯的紅色陽性信號(hào),而對(duì)照組中均未觀察到陽性信號(hào)。pIgR陽性信號(hào)主要位于皮膚、鰓和后腸上皮細(xì)胞和黏液細(xì)胞及其表面,鰓和后腸上皮細(xì)胞及其基部,以及肝管壁上皮細(xì)胞。IgM陽性信號(hào)主要位于皮膚、鰓和后腸上皮細(xì)胞和黏液細(xì)胞,后腸上皮下固有層,肝管壁上皮細(xì)胞中。
[Abstract]:In this paper , the expression of pIgR and IgM was detected by injecting and soaking . The results showed that the expression of pIgR and IgM was higher than that in the injection group . The results showed that the results showed that the anti - Japanese serum IgM monoclonal antibody 2D8 and anti - ichthys olivaceus skin mucinous McAb 2D8 reacted with serum , skin mucus , branchial mucus , intestinal mucus and bile at about 800kDa .

【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S943

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