本文關(guān)鍵詞： 龍眼 胚性愈傷組織 培養(yǎng)基 激素 類黃酮 類胡蘿卜素　出處：《福建農(nóng)林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：龍眼(DimocarpuslonganLour.)又稱桂圓,屬無患子科龍眼屬,是我國南方一種特色果樹。它富含類黃酮、類胡蘿卜素多種營養(yǎng)和功效成分,具有重要的藥用價(jià)值。龍眼胚性愈傷組織(Embryogenic callus,EC)具有增殖速度快、生長能力強(qiáng)和再生頻率高等優(yōu)點(diǎn),是研究龍眼體細(xì)胞胚胎發(fā)生和次生代謝的理想材料。本試驗(yàn)以龍眼'紅核子'胚性愈傷組織為材料研究了基本培養(yǎng)基、激素和培養(yǎng)時(shí)間對龍眼EC增殖、類黃酮和類胡蘿卜素及其合成相關(guān)基因表達(dá)的影響,以期為龍眼EC類黃酮和類胡蘿卜素合成研究奠定基礎(chǔ)。具體結(jié)果如下:1基本培養(yǎng)基對龍眼愈傷組織增殖和類黃酮積累的影響以龍眼EC為材料,采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),研究不同基本培養(yǎng)基(MS、1/2MS、1/4MS和B5)對龍眼EC增殖、類黃酮和類胡蘿卜素含量的影響。結(jié)果顯示,不同培養(yǎng)基中EC的增殖率由高到低依次為:MS1/2MSB51/4MS,其中,使用MS作為基本培養(yǎng)基時(shí)EC的增殖系數(shù)最高,達(dá)17.48;類黃酮含量由高到低分別為:MS1/2MSB51/4MS,其中,使用MS作為基本培養(yǎng)基時(shí),龍眼EC中類黃酮的含量可達(dá)5.06 mg/g。結(jié)果表明,MS培養(yǎng)基最有利于龍眼EC的增殖和類黃酮的累積,而1/4MS培養(yǎng)基效果最差。2激素對龍眼愈傷組織增殖、類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響以龍眼EC為材料,采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),研究激素對龍眼EC增殖、類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),激素對龍眼EC增殖的影響效應(yīng)由高到低依次為:2,4-DAgNO_3KT,其中處理組 5(MS + 2,4-D 1.0 mg/L+KT 0.50 mg/L + AgNO_3 7.5 mg/L)最有利于愈傷組織的增殖,其次是處理組6(MS + 2,4-D1.0mg/L+KT 0.75 mg/L + AgNO_3 2.5 mg/L),增殖系數(shù)分別達(dá)到 24.50 和 23.82,而處理組 7(MS + 2,4-D 1.5 mg/L+ KT 0.25 mg/L + AgNO_3 7.5 mg/L)和處理 9(MS + 2,4-D 1.5 mg/L+ KT 0.75 mg/L + AgNO_3 5.0 mg/L)中愈傷組織增殖效果最差,增殖系數(shù)僅為10.38和9.85。通過研究不同激素處理對類黃酮含量和產(chǎn)量的影響發(fā)現(xiàn),處理組 8(MS + 2,4-D 1.5 mg/L+ KT 0.50 mg/L + AgNO_3 2.5 mg/L)中類黃酮含量最高,高達(dá)4.24mg/g,而處理組7(MS + 2,4-D1.5mg/L+KT0.25mg/L + AgNO37.5mg/L)最差,僅為 1.85mg/g。不同激素對類黃酮含量影響的主次順序?yàn)?KT2,4-DAgNO_3;不同激素對類黃酮產(chǎn)量積累的影響效應(yīng)由高到低依次為2,4-DKTAgNO_3;最適宜龍眼類黃酮生產(chǎn)最佳配方處理組5(MS + 2,4-D1.0 mg/L+ KT 0.50 mg/L + AgNO3 7.5 mg/L)。通過研究不同激素處理中對類胡蘿卜素含量和產(chǎn)量的影響發(fā)現(xiàn):處理組 1(MS + 2,4-D 0.5 mg/L+ KT 0.25 mg/L + AgNO_3 2.5 mg/L)中類胡蘿卜素的積累效果最好,含量可達(dá)25.75 μg/g,而處理組 4(MS + 2,4-D 1.0 mg/L+ KT 0.25 mg/L + AgNO_3 5.0 mg/L)最差,類胡蘿卜素的積累量僅為9.5 μg/g;不同激素類胡蘿卜素產(chǎn)量積累的影響效應(yīng)由高到低依次為:AgNO_32,4-DKT,其中處理組1(MS + 2,4-D 0.5 mg/L+ KT 0.25 mg/L + AgNO_3 2.5 mg/L)和 5(MS+ 2,4-D 1.0 mg/L+ KT 0.50 mg/L + AgNO_3 7.5 mg/L)中類胡蘿卜素產(chǎn)量較大。最適宜龍眼類胡蘿卜素生產(chǎn)的最佳配方為處理1(MS +2,4-D 0.5 mg/L+KT 0.25 mg/L+AgNO3 2.5 mg/L)。綜上所述及分析得出最適宜龍眼類黃酮及類胡蘿卜素增殖、含量和產(chǎn)量的配方3培養(yǎng)時(shí)間對龍眼愈傷組織增殖、類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響基于2的結(jié)果,采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),研究培養(yǎng)時(shí)間對龍眼EC增殖以及類黃酮和類胡蘿卜素積累的影響,發(fā)現(xiàn)龍眼EC增殖系數(shù)高低依次為:10d15d20d7d;類黃酮含量高低順序?yàn)?10d15d7d20d,其中培養(yǎng)10d時(shí)類黃酮含量最高,高達(dá)4.2mg/g;類黃酮產(chǎn)量高低順序依次為:10 d15 d7 d20 d;類胡蘿卜素含量高低順序依次為:7 d15 d20 d10 d,其中培養(yǎng)7 d時(shí)類胡蘿卜素含量最大,為25.12μg/g,其相應(yīng)產(chǎn)量高低順序依次為:7d10 d15d20d。最佳配方為處理 1(MS + 2,4-D0.5mg/L+KT0.25 mg/L+AgNO3 2.5 mg/L)。綜合分析,培養(yǎng)10 d最有利于龍眼EC的增殖和生長以及類黃酮和類胡蘿卜的積累。4龍眼愈傷組織類黃酮和類胡蘿卜素合成相關(guān)基因的表達(dá)模式分析以FSD、EF-1α)、EIF-4α為內(nèi)參基因,使用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)研究了在不同培養(yǎng)基、不同激素處理和不同培養(yǎng)時(shí)間下類黃酮合成相關(guān)基因CHS、CHS、DFR和F3H基因以及類胡蘿卜素合成相關(guān)基因GGPS、PSY、ZDS和PDS在不同處理下的表達(dá)模式。通過研究不同基本培養(yǎng)基對這些基因的表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn):類黃酮合成相關(guān)的CHS、CHI、F3H基因在不同基本培養(yǎng)基中的表達(dá)水平由高到低依次為:1/2MSMS1/4MSB5,而DFR基因在不同基本培養(yǎng)基中的表達(dá)水平由高到低依次為:B5MS1/2MS1/4MS;類胡蘿卜素合成相關(guān)基因GGPS、PSY、ZDS和PDS基因均在1/2MS培養(yǎng)基中的表達(dá)量最高。通過研究不同激素處理對這些基因的表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn):類黃酮合成相關(guān)的CHS、CHI、F3H和DFR基因表達(dá)差異較大,其中CHS基因在處理 8(MS + 2,4-D 1.5 mg/L+ KT 0.50 mg/L + AgNO3 2.5 mg/L)中表達(dá)量最高,CHI和DFR在處理6(MS + 2,4-D 1.0 mg/L+KT 0.75 mg/L + AgNO3 2.5 mg/L)中表達(dá)量最高,F3H在處理 9(MS+ 2,4-D 1.5 mg/L+ KT 0.75 mg/L + AgNO3 5.0 mg/L)中表達(dá)量最高;而類胡蘿卜素合成相關(guān)的GGPS、PSY、ZDS和PDS基因均在處理9(MS + 2,4-D 1.5mg/L+KT 0.75mg/L + AgNO3 5.0mg/L)中的表達(dá)量最高。通過研究不同培養(yǎng)時(shí)間對這些基因的表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn)這些基因在培養(yǎng)10 d時(shí)表達(dá)量均為最高。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S667.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1480961