本文關(guān)鍵詞：百合體胚發(fā)生過(guò)程中miR166及其靶基因的鑒定與表達(dá)分析　出處：《沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：百合體細(xì)胞胚具有發(fā)生數(shù)量多、繁殖率高、易萌發(fā)成苗等優(yōu)點(diǎn),但同時(shí)也面臨著胚性能力不易保存,繁殖速率慢等難題。研究百合體細(xì)胞胚的發(fā)生機(jī)制,能夠?yàn)榘俸瞎S化快繁、轉(zhuǎn)基因育種、突變體篩選、人工種子研制等研究提供理論依據(jù)與實(shí)踐意義。蛋白質(zhì)的合成過(guò)程實(shí)際上就是基因表達(dá)的過(guò)程,而miRNA能夠通過(guò)引導(dǎo)靶基因mRNA降解、抑制翻譯等途徑負(fù)向調(diào)控植物基因的表達(dá)。因此,研究百合體胚發(fā)生過(guò)程中miRNA與靶基因的表達(dá)模式,有助于揭示百合體胚發(fā)生的分子調(diào)控機(jī)制,從而解決體胚生產(chǎn)過(guò)程中出現(xiàn)的一系列難題,本試驗(yàn)對(duì)百合體胚發(fā)生過(guò)程中的miR166及其靶基因進(jìn)行了鑒定與表達(dá)分析,并得出以下主要結(jié)論:1.lpu-miR166a/b/c和lda-miR166a/b/c的克隆及其靶基因預(yù)測(cè)采用特異的莖環(huán)引物反轉(zhuǎn)錄方法(Stem-1oop RT PCR),克隆得到了細(xì)葉百合(Lilium pumilumDC.Fisch.)lpu-miR166a、lpu-miR166b、lpu-miR166c 以及蘭州百合(Lilium davidii var.unicolor)lda-miR166a、lda-miR166b、lda-miR166c 成熟體序列并預(yù)測(cè)得到了相應(yīng)的靶基因,lpu-miR166a/lda-miR166a 的靶基因?yàn)?LMBR1,lpu-miR166b/lpu-miR166c的靶基因?yàn)?LpIDD1,lda-miR166b/lda-miR166c 的靶基因?yàn)長(zhǎng)dHD-ZIP Ⅲ。2.鑒定miR166及其靶基因的作用位點(diǎn)通過(guò)RLM-5'RACE技術(shù)鑒定miR166及其靶基因的作用位點(diǎn),結(jié)果表明lpu-miR1 66a/lda-miR 166a的切割位點(diǎn)有一個(gè)且在該位點(diǎn)的切割頻率為10/10;lpu-miR166b/lpu-miR166c的切割位點(diǎn)有一個(gè)且在該位點(diǎn)切割頻率為8/10;lda-miR166b/lda-miR166c的切割位點(diǎn)有一個(gè)且在該位點(diǎn)切割頻率為10/10。3.miR166及其靶基因在百合體胚發(fā)生過(guò)程中的表達(dá)分析lpu-miR166a/lpu-miR166b/lpu-miR166c與其靶基因的表達(dá)模式整體呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,其中l(wèi)pu-miR166a在胚性保存階段幾乎不表達(dá),在球形胚中的表達(dá)量出現(xiàn)峰值,隨著體胚的成熟,lpu-miR166a的表達(dá)量逐漸下降,其靶基因LpLMBR1的表達(dá)量則顯著上升;lpu-miR1 66b/lpu-miR1 66c在胚性保存階段表達(dá)量很低,在球形胚中的表達(dá)量顯著上升,隨著體胚的成熟,lpu-miR166c的表達(dá)量呈現(xiàn)逐步上升趨勢(shì),lpu-miR166b的表達(dá)量呈現(xiàn)出先降低后升高的趨勢(shì),而其靶基因LpIDD1的表達(dá)量則呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì);lda-miR166a與其靶基因LdLMBR1的表達(dá)模式整體呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,隨著體胚的成熟,lda-miR166a的表達(dá)量呈逐步上升趨勢(shì),在子葉形胚時(shí)期達(dá)到峰值,而LdLMBR1的表達(dá)量沒(méi)有明顯變化;lda-miR166b/lda-miR166c在胚性保存時(shí)期表達(dá)量最低,隨著體胚的發(fā)育,lda-miR166c的表達(dá)量逐漸升高,lda-miR166b的表達(dá)量先升后降再升,LdHD-ZIP Ⅲ的表達(dá)量先降后升再降,說(shuō)明lda-miR166b對(duì)LdHD-ZIP Ⅲ起主要調(diào)控作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S682.29

【參考文獻(xiàn)】

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