本文關(guān)鍵詞：三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合肝毒性的蛋白質(zhì)組學(xué)研究　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目前關(guān)于三聚氰胺及三聚氰酸的毒性研究主要是圍繞腎臟、泌尿、神經(jīng)、生殖、免疫等方面展開的,還沒有任何學(xué)者對三聚氰胺毒性在整體差異蛋白角度進行研究。本試驗采用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探究三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合攻毒小鼠的毒性,對小鼠肝臟的全部蛋白進行差異分析,確定三聚氰胺類物質(zhì)對肝臟發(fā)揮毒性作用的主要差異蛋白,尋找靶蛋白并進行驗證,再對蛋白所屬的細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路進行分析,從而探討該類物質(zhì)作用于小鼠肝臟的毒性作用機理,以完善三聚氰胺的相關(guān)毒理學(xué)資料。本研究將30只體重為22-24g的SPF級KM系雄性小鼠隨機分為空白對照組、三聚氰胺組(30mg·kg-1)和三聚氰胺與三聚氰酸聯(lián)合組(15+15mg.kg-1)。連續(xù)飼養(yǎng)28d,隔天灌胃,第29d無菌取出肝臟制成蛋白樣品,進行SDS-PAGE檢測。采用iTRAQ技術(shù)進行質(zhì)譜鑒定和蛋白檢索后得到差異蛋白;對差異蛋白進行GO分析和KEGG pathway分析等生物信息學(xué)分析,尋找與差異蛋白顯著相關(guān)的生物學(xué)功能、所參與的代謝通路和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等;篩選出差異蛋白PDIA6,HSP70和HSPA4L并用Western-blot法進行驗證。結(jié)果表明:1.利用蛋白組學(xué)iTRAQ技術(shù)對小鼠肝臟進行檢測,共計獲得20284個唯一肽段,鑒定到3695個差異蛋白質(zhì)。三聚氰胺組與空白對照組相比,共有166個顯著差異蛋白,其中130個上調(diào),36個下調(diào),.三聚氰胺與三聚氰酸聯(lián)合組共有差異蛋白242個,其中上調(diào)161個,下調(diào)81個(上調(diào)1.2,下調(diào)0.83,值0.05)。2.三聚氰胺組的差異蛋白參與的生物學(xué)過程有69種,分子功能有23種,細(xì)胞組分有23種;聯(lián)合組有51種差異蛋白參與生物學(xué)過程,46種參與分子功能,10種參與細(xì)胞組分。3.三聚氰胺組與空白對照組相比有10條KEGG富集通路;聯(lián)合組與空白對照組相比有13條KEGG富集通路。4.本實驗采用Western-blot法檢測HSP70、PDIA6和HSPA4L的蛋白表達水平。發(fā)現(xiàn)與空白對照組相比,三聚氰胺與三聚氰酸聯(lián)合組的HSP70和HSPA4L的蛋白表達水平明顯低于空白組,PDIA6的蛋白表達水平明顯高于空白組(p0.05);三聚氰胺組與對照組相比,HSPA4L的蛋白水平降低(p0.05),其他表達水平無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果可以看到與iTRAQ測得的差異蛋白表達趨勢是相符的,同時也說明三聚氰胺與三聚氰酸聯(lián)合使HSP70和HSPA4L表達下調(diào),PDIA6表達上調(diào),對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路促進細(xì)胞凋亡起到積極作用。本研究也說明采用先進的差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)iTRAQ標(biāo)記的方法對三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合肝臟毒性作用的研究是可信的,為三聚氰胺的研究提供一些微觀基礎(chǔ)資料。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S859.8

【參考文獻】

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