發(fā)布時(shí)間：2017-12-24 07:12

  本文關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)試紙的研制　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 豬圓環(huán)病毒2型 Cap蛋白 膠體金免疫層析試紙

【摘要】：豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)能夠引發(fā)斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS),對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害極大。PCV2不斷變異且易與其他病毒混合感染,為其檢測(cè)帶來(lái)重重困難。目前PCV2抗體檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和膠體金免疫層析試紙(immunochromatographic strip,ICS),其中ICS具有快速、靈敏、特異、結(jié)果易判讀、不需要專業(yè)實(shí)驗(yàn)操作人員和精密的儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn),因此比較適用于大量臨床血清的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。本研究旨在獲得具有良好免疫反應(yīng)性的PCV2重組衣殼蛋白(capsid protein,Cap protein),并制備PCV2抗體檢測(cè)膠體金免疫層析試紙,以期給PCV2疫苗的評(píng)價(jià)及免疫方案的制定提供技術(shù)支撐。本研究的內(nèi)容和結(jié)果如下:1.豬圓環(huán)病毒病2型Cap蛋白的純化本研究將菌種pET-28a-ORF2-BL21,進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá),利用鎳親和層析法純化可溶性重組Cap蛋白,并對(duì)其進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明,表達(dá)的重組蛋白分子量約為26 kDa,主要以可溶性蛋白的形式存在,純化后的蛋白純度可達(dá)90%,濃度為1.31 mg/mL,每升菌液純化可得30.6 mg蛋白。Western bloting和間接ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)重組蛋白能夠與PCV2陽(yáng)性血清反應(yīng)。本研究所制備的重組Cap蛋白具有較高的純度和良好的免疫反應(yīng)性,有望用于PCV2抗體檢測(cè)免疫層析試紙的研制。2.豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)膠體金免疫試紙的研制用膠體金標(biāo)記重組PCV2 Cap蛋白,并將標(biāo)記后的Cap蛋白噴涂于玻璃纖維膜上,制備金標(biāo)墊,將金黃色葡萄球菌A蛋白噴涂在檢測(cè)線上,并將PCV2多克隆抗體IgG噴涂在質(zhì)控線上,組裝成試紙條,鑒定試紙條的性能。結(jié)果顯示,該試紙結(jié)果判讀時(shí)間為5 min,對(duì)PCV2陽(yáng)性血清有高度的特異性,而與豬其它相關(guān)病毒的陽(yáng)性血清無(wú)交叉反應(yīng),試紙條的靈敏性為1㑳25600與商品化ELISA試劑盒相近。試紙?jiān)谑覝卮鎯?chǔ)6個(gè)月,其性能無(wú)明顯變化。用該試紙檢測(cè)274份血清樣品,結(jié)果表明,其與國(guó)產(chǎn)豬圓環(huán)病毒2型ELISA試劑盒總符合率為98.17%(269/274)。本研究制備的PCV2抗體檢測(cè)膠體金免疫層析試紙具有高度特異、快捷靈敏、穩(wěn)定準(zhǔn)確且操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn),適用于大量臨床樣品的檢測(cè),為PCV2的抗體檢測(cè)提供了有效的工具。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.651

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;豬圓環(huán)病毒的管理研究[J];中國(guó)豬業(yè);2007年09期

2 龔振華,尹燕博,沈廣;豬圓環(huán)病毒:一種新發(fā)現(xiàn)的病原[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2000年S1期

3 王麗榮;;豬圓環(huán)病毒的病原學(xué)與診斷[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年06期

4 孫艷明;趙德明;;豬圓環(huán)病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2006年07期

5 IGORMOROZOV,李凱年;豬圓環(huán)病毒及臨床意義[J];國(guó)外畜牧科技;1999年05期

6 馮衛(wèi);陳沫;楊曉容;聶克艷;陳靜;姜萍;楊林;劉海;顏艷;王海;;基于文獻(xiàn)計(jì)量法分析我國(guó)豬圓環(huán)病毒的研究現(xiàn)狀[J];農(nóng)技服務(wù);2013年12期

7 王志軍;郭慧娟;李秀麗;董樹(shù)仁;鄢明華;;豬圓環(huán)病毒病原學(xué)研究進(jìn)展[J];天津農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年08期

8 ;獸藥新產(chǎn)品——豬圓環(huán)病毒疫苗[J];科技致富向?qū)?2010年28期

9 段麗麗,文心田,曹三杰,馬曉平;豬圓環(huán)病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2005年06期

10 丁昌春;鄭新勇;楊世興;;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2006年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王東方;安春霞;劉光輝;閆若潛;吳志明;;豬圓環(huán)病毒1、2型多重PCR診斷方法建立及應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

2 馮麗麗;張改平;張麗萍;朱禮倩;李嬌;楊蘇珍;席俊;;豬圓環(huán)病毒致病機(jī)理的研究進(jìn)展[A];河南省畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨2008年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

3 黃立平;劉長(zhǎng)明;危艷武;陸月華;郭龍軍;溫士剛;武嘉男;吳洪麗;;檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型血清中和抗體阻斷ELISA方法的建立及應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

4 程榮華;劉云志;孫健;呼延含蓉;趙欣;邵洪澤;張麗媛;楊金生;;淺談豬圓環(huán)病毒研究現(xiàn)況[A];低碳經(jīng)濟(jì)與科學(xué)發(fā)展——吉林省第六屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2010年

5 王鑫;葉賀佳;李敏;仇微紅;孫招金;梁昭平;;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

6 郎洪武;趙德明;王力;張廣川;程君生;宋立;;豬圓環(huán)病毒分離、鑒定及豬斷奶多系統(tǒng)衰弱綜合征[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十一次獸醫(yī)病理學(xué)、第十次動(dòng)物病理生理學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

7 郎洪武;趙德明;王力;張廣川;程君生;宋立;;豬圓環(huán)病毒分離、鑒定及豬斷奶多系統(tǒng)衰弱綜合征[A];第四屆中國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

8 蘆銀華;談國(guó)蕾;陳德勝;陳溥言;;豬圓環(huán)病毒、豬繁殖和呼吸綜合征病毒快速檢測(cè)方法的研究[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第五屆理事會(huì)第二次全體會(huì)議暨防檢疫專業(yè)委員會(huì)第7次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2002年

9 萬(wàn)遂如;;豬圓環(huán)病毒感染[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2003年

10 萬(wàn)遂如;;豬圓環(huán)病毒感染的防治[A];現(xiàn)代化養(yǎng)豬企業(yè)經(jīng)營(yíng)管理研討會(huì)論文集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 臨城縣畜牧辦公室 張榮連;豬圓環(huán)病毒與肺炎混感的診治[N];河北科技報(bào);2014年

2 江蘇省農(nóng)科院獸醫(yī)所 俞正玉 林繼煌;豬圓環(huán)病毒感染[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2004年

3 李凱年 譯;日本韓國(guó)發(fā)現(xiàn)豬圓環(huán)病毒感染[N];中國(guó)畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

4 記者 尹江勇;“豬圓環(huán)病毒疫苗”技術(shù)實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)化[N];河南日?qǐng)?bào);2010年

5 張曉鵬　記者 李麗云;國(guó)內(nèi)首創(chuàng)“豬圓環(huán)病毒新一代疫苗”研制成功[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

6 記者 孟山　李松戰(zhàn);豬圓環(huán)病毒疫苗在洛研制成功[N];洛陽(yáng)日?qǐng)?bào);2010年

7 記者 喬地　通訊員 聞亞麗;“豬圓環(huán)病毒”疫苗批準(zhǔn)上市[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

8 邢臺(tái)市獸醫(yī)院 邢蘭君 楊立帆;豬圓環(huán)病毒與附紅細(xì)胞體混感怎么辦[N];河北科技報(bào);2014年

9 張曉鵬;“豬圓環(huán)病毒疫苗”全國(guó)推廣[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2010年

10 本報(bào)記者 喬地　通訊員 馬焱 鄭世孝;科技創(chuàng)新,走在富民強(qiáng)國(guó)的路上[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 周瑩珊;豬圓環(huán)病毒2型感染誘導(dǎo)PK-15細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與凋亡的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

2 時(shí)建立;豬圓環(huán)病毒2型糖基化位點(diǎn)突變對(duì)病毒復(fù)制能力和致病性的影響及抗體膠體金檢測(cè)方法的建立[D];山東師范大學(xué);2016年

3 蘆銀華;華東地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)調(diào)查及其感染性核酸的構(gòu)建[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

4 司興奎;豬圓環(huán)病毒2型感染對(duì)豬免疫功能影響的細(xì)胞與分子機(jī)制[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 曲連東;豬圓環(huán)病毒2型地方株的分離鑒定和診斷方法的建立及應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 華利忠;豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 溫立斌;豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

8 董林;豬圓環(huán)病毒2型診斷試劑盒的研制與應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2014年

9 朱善元;江蘇部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的檢測(cè)及其免疫接種試驗(yàn)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

10 潘群興;豬圓環(huán)病毒2型感染分子診斷與防制的相關(guān)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 賈蕊;豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)試紙的研制[D];鄭州大學(xué);2017年

2 陳冬杰;豬圓環(huán)病毒2型與豬鼻支原體共感染協(xié)同致病性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 王曉卉;豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品的研制及定值方法研究[D];中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2015年

4 高雪洪;閩西地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型血清學(xué)調(diào)查及遺傳變異分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

5 王力圓;不同品種豬感染圓環(huán)病毒Ⅱ型后肺組織差異miRNA的鑒定及功能分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 朱鵬;豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的克隆與表達(dá)及其免疫原性研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 李麗;豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的表達(dá)及抗體ELISA方法的建立[D];中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2011年

8 侯成才;豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白基因在畢赤酵母中的表達(dá)與復(fù)合水佐劑的研制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 陳福旺;豬瘟病毒感染報(bào)告細(xì)胞系和豬圓環(huán)病毒2型敏感細(xì)胞系的建立[D];吉林大學(xué);2016年

10 陳靈艷;豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白ORF2的原核表達(dá)系統(tǒng)的研究[D];福州大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：1327371