本文關(guān)鍵詞：菊花再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：本研究首先獲得了菊花品種'436'、'雙粉匙'、'K'、'WY29'的無菌苗,然后以4個(gè)品種無菌苗幼嫩葉片為試驗(yàn)材料,添加不同濃度配比的植物生長調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)其分化和生根,建立了高效穩(wěn)定的再生體系,為菊花的品種改良奠定了理論基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)上初步建立了 '436'遺傳轉(zhuǎn)化體系,為今后菊花品種基因轉(zhuǎn)化的研究提供參考依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.菊花再生體系的建立采取菊花品種'436'、'雙粉匙'、'K,、'WY29'的頂芽作為外植體,使用0.1%的升汞對其進(jìn)行消毒,獲得無菌苗的最佳消毒時(shí)間分別為6 min、6 min、5 min、7 min。'436'、'雙粉匙'、'K'、'WY29'的最適增殖培養(yǎng)基分別為MS+0.5mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1 NAA;MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.3 mg·L-1 NAA;MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA;MS+0.5mg·L-1 6-BA+0.1mg·L-1 NAA。在繼代過程中,菊花品種'WY29,培養(yǎng)基內(nèi)出現(xiàn)內(nèi)生菌,利用頭孢霉素對其進(jìn)行抑制,頭抱霉素抑制菊花'WY29'內(nèi)生菌的最佳濃度為80 mg·L-1。通過對葉片的誘導(dǎo)分化,'436'的最適分化培養(yǎng)基為MS+2.0 mg·L-1 6-BA+0.4 mg·L-1 NAA,再生率高達(dá) 92.1%;'K'在最適分化培養(yǎng)基 MS+2.0 mg·L-16-BA+0.2mg·L-1 NAA上不定芽再生率為75.3%;'雙粉匙'和'WY29'的再生率較低,分別為37.2%和30.2%。對'436'不定芽進(jìn)行生根誘導(dǎo),最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.2 mg·L-1,選擇再生率最高的菊花品種'436'作為遺傳轉(zhuǎn)化受體繼續(xù)研究。2.遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步建立篩選出卡那霉素抑制菊花品種'436'不定芽分化和生根的臨界濃度分別為10 mg·L-1和7.5 mg·L-1;頭孢霉素抑制農(nóng)桿菌的最適濃度為200 mg·L-1。用含有表達(dá)載體pC4MBL41301-CBL的農(nóng)桿菌GV3101對菊花品種'436'的無菌苗葉片進(jìn)行侵染,研究結(jié)果表明,菊花品種'436'的無菌苗葉片在經(jīng)過1 d預(yù)培養(yǎng),OD600≈0.5時(shí)侵染10 min,共培養(yǎng)2d,延遲篩選3d時(shí),抗性芽再生率達(dá)到最高。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S682.11

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本文編號(hào)：1309458