本文關(guān)鍵詞：無乳鏈球菌對(duì)奶牛乳腺成纖維細(xì)胞瘦素和細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的影響

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【摘要】：無乳鏈球菌(Streptococcus agalctiae,S.agalactiae)是引起奶牛乳腺炎的主要病原菌之一,能夠?qū)е履膛Ｈ橄倮w維化。奶牛乳腺成纖維細(xì)胞(BMFB)是乳腺組織的主要間質(zhì)細(xì)胞,本研究目的是探討S.agalactiae對(duì)體外培養(yǎng)的BMFB瘦素(Leptin)及其功能性受體(OB-R b)、細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)表達(dá)的影響,以探索S.agalactiae引起奶牛乳腺纖維化中Leptin與奶牛乳腺纖維化的關(guān)系。本研究采用不同濃度熱滅活的S.agalactiae(OCFU/mL、105CFU/mL、106CFU/mL和108CFU/mL)作用于體外培養(yǎng)的BMFB,于不同作用時(shí)間(6h、12h、24h、48h和72h)提取細(xì)胞的總mRNA和總蛋白,采用熒光定量PCR和Westemblot方法檢測(cè)Leptin及其功能性受體和細(xì)胞外基質(zhì)αα-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、Ⅰ型膠原蛋白(COLⅠα 1)mRNA及蛋白的表達(dá),采用ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞外基質(zhì)透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,HA)的表達(dá)情況。結(jié)果表明:(1)不同濃度的S.agalactiae作用BMFB不同時(shí)間后,均可不同程度地促進(jìn)Leptin及OB-R b mRNA和蛋白的表達(dá)。Leptin mRNA和蛋白的表達(dá)基本一致,6h、12h105CFU/mL濃度極顯著高于對(duì)照組(P0.01),24h、48h、72h表達(dá)水平基本隨著濃度的增加而增加;OB-Rb mRNA和蛋白的表達(dá)基本一致,隨著濃度的增加而增加,mRNA的表達(dá)48h108CFU/mL濃度最大,蛋白的表達(dá)12h108CFU/mL濃度最大。(2)不同濃度的S.agalactiae作用于BMFB均能不同程度地促進(jìn)α-SMA和COLⅠα 1的mRNA及蛋白的表達(dá)。α-SMA mRNA和蛋白的表達(dá)基本一致,各個(gè)作用時(shí)間105CFU/mL濃度極顯著高于對(duì)照組(P0.01),12h表達(dá)最大;COLⅠα 1 mRNA和蛋白的表達(dá)不一致,mRNA的表達(dá)隨著時(shí)間的延長呈先降低再升高的趨勢(shì),24h、48h表達(dá)降低,72h再升高,6h 108CFU/mL濃度表達(dá)最大,蛋白的表達(dá)各個(gè)作用時(shí)間105CFU/mL、106CFU/mL濃度極顯著高于對(duì)照組(P0.01),108CFU/mL濃度表達(dá)低于對(duì)照組。(3)不同濃度的S.agalactiae于BMFB后,細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HA的表達(dá)不同程度地上升,24h106CFU/mL濃度表達(dá)最大。綜上所述,熱滅活的S.agalactiae能夠促進(jìn)體外培養(yǎng)的BMFBLeptin及OB-Rb mRNA和蛋白的表達(dá),與時(shí)間和濃度有一定的關(guān)系;S.agalactiae作用于BMFB后,三種細(xì)胞外基質(zhì)(α-SMA、COLⅠα 1和HA)的表達(dá)均上升。提示Leptin在S.agalactiae致奶牛乳腺纖維化中有一定的作用。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S858.23

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本文編號(hào)：1281371